Ag+Ab-熒光→Ag.Ab－熒光
(2)間接熒光法可克服直接法需製備多種熒光抗體的複雜操作。將組織或細胞上的抗原直接與相應抗體（不標記熒光）結合，此為第一抗體，再把能與第一抗體特異結合的熒光標記的抗免疫球蛋白抗體加入，此為熒光標記的第二抗體，觀察結果與直接法相同。間接法比直接法敏感性高，如果用於檢查抗原的第一抗體是人或動物的，隻需製備一種抗人或動物的免疫球蛋白熒光抗體，反應式如下：
Ag+Ab→Ag.Ab+G-熒光→Ag.Ab.G－熒光
（二）酶聯免疫分析法
酶聯免疫分析法（Enzyme Immuno Assay,EIA）是當前應用最廣泛的免疫檢測方法。本法將抗原抗體反應的特異性與酶對底物高效催化作用結合起來，根據酶作用底物後顯色，以顏色變化判斷試驗結果，可經酶標測定儀做定量分析，敏感度可達ng水平。常用於標記的酶有辣根過氧化物酶(Horseradish peroxidase)、堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase）等，它們與抗體結合不影響抗體活性。這些酶具有一定的穩定性，製成酶標抗體可保存較長時間。目前常用的方法有酶標免疫組化法和酶聯免疫吸附法。前者測定細胞表麵抗原或組織內的抗原；後者主要測定可溶性抗原或抗體。本法既沒有放射性汙染又不需昂貴的測試儀器，所以較放射免疫分析法更易推廣。
酶聯免疫吸附測定（Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）:將抗原或抗體吸附在固相載體表麵，加入酶標抗體或抗原，使抗原抗體反應在固相載體表麵進行，形成酶標記的免疫複合物，經過洗滌後，遊離的酶標抗體或抗原被衝掉，而形成的酶標記免疫複合物不能被衝掉，加入底物顯色後，用肉眼或分光光度計判斷結果，可用間接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。間接法的反應式如下：
Ag+Ab→Ag.Ab+G-酶→Ag.Ab.G－酶底物Ag.Ab.G－酶顯色
（三）放射免疫分析法
放射免疫分析法（Radio Immuno Assay RIA）應用競爭性結合的原理，使放射性同位素標記抗原（或抗體）與相應抗體（或抗原）結合，通過測定抗原抗體結合物的放射活性判斷結果，本方法可進行超微量分析，敏感性高。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。反應式如下:
Ag+Ab-125Ⅰ→Ag.Ab-125Ⅰ(測定其放射性)或Ag-125Ⅰ+Ab→Ag.125Ⅰ.Ab(測定其放射性)
放射免疫分析常用的方法有液相法和固相法兩種。
(1)液相法將待檢標本（例如含胰島素抗原）與定量的同位素標記的胰島素（抗原）和定量的抗胰島素抗體混合，經一定作用時間後，分離收集抗原抗體複合物及遊離的抗原，測定這兩部分的放射活性，計算結合率。在反應係統中，待檢標本的胰島素抗原與同位素標記的胰島素競爭性地與胰島素抗體結合。非標記的抗原越多，標記抗原與抗體形成的複合物越少。非標記抗原含量與標記抗原抗體複合物的量呈一定的函數關係。預先用標準的非標記抗原作成標準曲線後，即可查出待檢標本中胰島素的含量。
(2)固相法將抗原或抗體吸附到固相載體表麵，然後加待檢標本和標記抗體或標記抗原，保溫後形成標記抗原抗體複合物，通過衝洗，洗去遊離的標記抗體或抗原，形成的標記抗原抗體複合物因吸附到固相載體上，所以不能被緩衝液洗掉，測定固相載體的放射性即可定性或定量測定抗原或抗體。常用的固相載體有聚苯乙烯小管或硝酸纖維素膜。放射免疫分析法應用範圍廣泛，可測定多種激素（胰島素、生長激素、甲狀腺素等）、維生素、藥物、IgE等。