一般可保藏1~2年。
4.2.4濾紙保藏法
是一種以無毒濾紙作為食用菌孢子吸附載體長期保藏菌種的方法。
取白色(收集深色孢子)或黑色(收集淺色孢子)濾紙,剪成4cm×0.8cm的小紙條,平鋪在培養皿中,用紙包好,在0.1MPa下滅菌30min。采用懸鉤法收集孢子,除去濾紙水分,使濾紙水分含量達2%左右,然後低溫保存。
使用時以無菌操作攝取濾紙條,將有孢子的一麵貼在培養基上,於適溫培養一周左右,即可觀察到孢子萌發和菌絲生長的狀況。
4.3防止菌種退化的方法
(1)活化移植利用低溫保藏菌種,使菌種處於較低的生命活動水平。但時間太長,菌絲也會老化。對已保存3~4個月的菌種要重新移植。移植後的菌種在適宜的溫度下培養7~15d左右,菌絲即可布滿斜麵,再繼續低溫保藏或使用。保藏的菌種,培養基中需加入磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀和蛋白腖等,防止培養基的pH變化。
(2)更換營養成分各種食用菌對培養基的營養成分大多數有“喜新厭舊”的特點,多次連續使用同一比例的培養基會使菌絲營養不良,引起菌種的退化。生產中需根據不同菌種特性變換培養基營養成分,提高菌種生活能力,以獲得優良菌種。
(3)適宜環境條件菌種培養過程中,創設適宜的環境條件,如溫度、光照度、空氣等,使其在良好的條件下生長,保證菌絲健壯,穩定性狀。
(4)優擇劣汰不管是選育還是移植的菌種,在保藏或使用時,一定要精心挑選。對於生活力、菌絲特點有明顯改變的或有雜菌汙染的,寧棄勿用,這是獲得優良菌種的重要保證。
4.4菌種複壯
食用菌菌種長期使用、長期保藏,以及轉管次數過多,都會導致菌絲活力下降,接種後菌絲生長緩慢、纖細、稀疏,因此必須采取措施進行菌種的複壯。生產上使用的菌種要經常進行複壯,目的在於確保菌種優良性狀和純度,防止退化。
4.4.1衰退表現及根源
正常栽培條件下,在生產使用過程中,菌種的優良性狀及典型性逐漸喪失的現象,稱退化現象,表現在產量降低、品種變劣、整齊度下降、生活力衰退、抗逆性減弱。菌種退化的原因很多,外因是傳代過多,條件不適宜;內因是菌種遺傳物質發生了不良變異。
4.4.2菌種複壯方法
(1)無性繁殖與有性繁殖交替轉管多次的菌種改用組織分離,可有明顯複壯作用。在原有優良菌株中,通過栽培出菇,然後對不同係的菌株進行對照,挑選性狀穩定、沒有變異的,再次進行孢子分離、提純,使之繼代。重新獲得優良菌株後再進行轉管使用。
(2)菌絲尖端分離在顯微鏡下,應用顯微操作器,把菌絲尖端切下轉移至新的PDA培養基上培養。這樣可以保證該菌種的純度,並且可以起到脫病毒的作用,使菌種保持原有品種的遺傳物質,恢複原來的生活力和優良種性,達到複壯的目的。
(3)活化移植同4.3(1)。
(4)適當更換培養基長期在同一培養基上繼代培養的菌種,生活力可能逐漸下降。改變培養條件、經常變換營養成分或添加酵母膏、氨基酸、維生素等,以提高菌種活力。對因營養基質不適而衰退的菌種,有一定的複壯作用。
【複習思考題】
1.簡述菌種保藏的工藝流程。
2.菌種保藏的原理是什麼?為什麼要進行菌種保藏?
3.菌種保藏的方法有哪些?
4.什麼是菌種複壯?為什麼要進行菌種複壯?
5.菌種複壯的方法有哪些?
【操作與實踐】
學生以分工、合作的方式完成菌種保藏,詳細記錄操作過程和結果。