4.2.1罐體清洗、檢查
（1）清洗、檢查方法發酵罐在每次使用後或再次生產前，都必須對其進行徹底的清洗之後才能投料使用。操作時，用自來水管衝洗內壁並將工作燈開啟，檢查加熱棒、提升管及溫度計保護套管等，有異物須徹底除去，內壁粘附的汙物可以用軟布揩拭（加熱棒有少許糊料液正常），洗罐水可以由接種閥排出。另外，檢查各個閥門、加熱棒、控製箱、氣泵等是否正常，如有故障，需及時排除。
（2）煮罐方法新罐初次使用、罐長時間不用、上一罐染菌、更換生產品種等，需要煮罐。煮罐的具體方法是：關閉罐底部的接種閥和進氣閥，加水至視鏡中線，啟動加熱器，當溫度達到124℃時維持35min後關閉排氣閥，20min後把煮罐水放出即可進入生產。
4.2.2培養基製作
製作方法參照母種培養基製作。
4.2.3上料
關閉進氣閥和接種閥，通過接種口將培
養基倒入培養器中，加自來水調整料液到標準線（55～75L之間），擰緊接種口蓋滅菌，同時進行濾芯和無菌水的滅菌。
4.2.4滅菌
（1）打開控製櫃電源開關，按滅菌選擇鍵14s，加熱Ⅰ、加熱Ⅱ指示燈亮，加熱管開始工作。當溫度達100℃時食用菌生產可稍稍開啟排放閥，以排除冷氣。
（2）當溫度達到124℃時，開始計時。需要注意的是，濾芯需要在使用前半小時滅菌裝好，裝好後要一直開啟氣泵以便將濾芯吹幹，因此必須在滅菌計時就開泵通氣。滅菌計時過程中，當溫度達到設定溫度時，控製櫃自動斷電維持溫度；當溫度低於設定溫度時，電源又開始加熱。在計時過程中，在35min內前、中、後排三次料，每次排料時間為5～10min，共放料35L。
（3）當滅菌計時到35min時，控製櫃自動報警，此時按控製櫃報警停止鍵3停止報警，培養基滅菌結束，進入培養狀態。這時立即通入冷水降溫，並在短時間內，按照無菌操作接上通氣管。此時罐壓還很高不能通氣，需通過貯氣罐底部的排氣閥調整罐壓在0.12MPa，當培養器的壓力低於0.10MPa時送氣。
4.2.5冷卻
當滅菌時間到時，立即通入冷卻水降溫到適宜培養的溫度。在冷卻水接通後，用火焰灼燒進氣閥10～20s，並迅速接好進氣管（氣泵自打開後一直不要停）。當貯氣罐的壓力高於培養罐的壓力0.02MPa時，打開進氣閥供氣，使培養基在氣體的攪拌下迅速降溫。正常情況下，CQY-100型冷卻至培養溫度約需60min，CQY-50型約需45min。
4.2.6接種
準備好菌種和接種物品和工具後，逐漸開大排氣閥，待培養器壓力降至“0”時，關閉排氣閥並點燃火圈，旋開接種口蓋（氣泵不關閉），按照無菌操作將棉塞拔下並倒入菌種，要求動作快、操作準確。旋緊接種孔蓋，調整培養器罐壓至0.02～0.04MPa，並檢查培養溫度和空氣流量1.2m3/h以上，進入培養階段。
在規模化生產中，菌種需不斷擴大繁殖，這樣頻繁繼代繁殖會造成菌種種性退化、液體菌種活力減弱，所以需要對菌種進行提純複壯，以保持種性的穩定。
4.2.7培養
根據不同品種設置不同的培養溫度，常規品種選擇24～26℃培養檔，高溫品種選擇28～31℃培養檔；空氣流量調至1.2m3/h以上，罐壓在0.02～0.04MPa。培養期間設專人管理，接種24h以後，每隔12h可從接種管取樣一次，觀察記載菌種生長和萌發情況，一般檢查菌液澄清度、氣味、菌球數量等。培養周期為72～96h。
4.2.8培養袋接種
培養好的液體菌種即可用於生產，這樣菌種活力好、萌發好。液體菌種保藏後使用，易造成菌種酶活力下降或菌體自溶，降低活力。
接種量以菌種接入瓶或袋內覆蓋表麵為宜。通常850mL的塑料瓶接15～18mL；菌種用量少，菌種局部萌發、封麵，易造成汙染。
4.3液體菌種培養方法的比較
液體菌種生產主要有搖瓶培養法和深層發酵培養法兩種方法。搖瓶培養法是將食用菌的母種接入已滅菌的三角瓶或輸液瓶培養液中，然後置於搖床上振蕩培養；深層發酵培養法是將菌種接入發酵罐培養液中，進行深層發酵培養。
【複習思考題】
1.什麼是液體菌種？它有哪些特點？
2.簡述液體菌種的製作過程。
3.怎樣進行液體菌種的檢驗？
4.如何使用液體菌種？
【操作與實踐】
獨立完成液體菌種製備，詳細記錄操作過程和結果。考核要點與方法見下表。