(5)庚烷。
(6)10%次氯酸鈉溶液。
(7)腸毒素產毒培養基
①成分：蛋白腖20.0g，胰消化酪蛋白200mg(氨基酸)，氯化鈉5.0g，磷酸氫二鉀1.0g，磷酸二氫鉀1.0g，氯化鈣0.1g，硫酸鎂0.2g，煙酸0.01g，蒸餾水1000mL，pH7.2～7.4。
②製法：將所有成分混於水中，溶解後調節pH，121℃高壓滅菌30min。
(8)營養瓊脂
①成分：蛋白腖10.0g，牛肉膏3.0g，氯化鈉5.0g，瓊脂15.0～20.0g，蒸餾水1000mL。
②製法：將除瓊脂以外的各成分溶解於蒸餾水內,加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正pH至7.2～7.4。加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂溶化。分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min。
2.儀器和設備
(1)電子天平：感量0.01g。
(2)均質器。
(3)離心機：轉速3000～5000g。
(4)離心管：50mL。
(5)濾器：濾膜孔徑0.2μm。
(6)微量加樣器:20～200μL、200～1000μL。
(7)微量多通道加樣器:50～300μL。
(8)自動洗板機(可選擇使用)。
(9)酶標儀：波長450nm。
3.原理
本方法可用A、B、C、D、E型金黃色葡萄球菌腸毒素分型酶聯免疫吸附試劑盒完成。本方法測定的基礎是酶聯免疫吸附反應（ELISA）。96孔酶標板的每一個微孔條的A～E孔分別包被了A、B、C、D、E型葡萄球菌腸毒素抗體，H孔為陽性質控，已包被混合型葡萄球菌腸毒素抗體，F和G孔為陰性質控，包被了非免疫動物的抗體。樣品中如果有葡萄球菌腸毒素，遊離的葡萄球菌腸毒素則與各微孔中包被的特定抗體結合，形成抗原抗體複合物，其餘未結合的成分在洗板過程中被洗掉；抗原抗體複合物再與過氧化物酶標記物（二抗）結合，未結合上的酶標記物在洗板過程中被洗掉；加入酶底物和顯色劑並孵育，酶標記物上的酶催化底物分解，使無色的顯色劑變為藍色；加入反應終止液可使顏色由藍變黃，並終止了酶反應；以450nm波長的酶標儀測量微孔溶液的吸光度值，樣品中的葡萄球菌腸毒素與吸光度值成正比。
4.檢測步驟
(1)從分離菌株培養物中檢測葡萄球菌腸毒素方法待測菌株接種營養瓊脂斜麵（試管18mm×180mm），37℃培養24h，用5mL生理鹽水洗下菌落，傾入60mL產毒培養基中，每個菌種種一瓶，37℃振蕩培養48h，振速為100次/min，吸出菌液離心，8000r/min、20min，加熱至100℃、10min，取上清液,取100μL稀釋後的樣液進行試驗。
(2)從食品中提取和檢測葡萄球菌毒素的方法
①乳和乳粉：將25g乳粉溶解到125mL、0.25mol/L、pH8.0的Tris緩衝液中，混勻後同液體乳一樣按以下步驟製備。將乳於15℃、3500g離心10min。將表麵形成的一層脂肪層移走，變成脫脂乳。用蒸餾水對其進行稀釋（1∶20）。取100μL稀釋後的樣液進行試驗。
②脂肪含量不超過40%的食品：稱取10g樣品絞碎，加入pH7.4的PBS液15mL進行均質。振搖15min。於15℃、3500g離心10min。必要時，移去上麵脂肪層。取上清液進行過濾除菌。取100μL的濾出液進行試驗。
③脂肪含量超過40%的食品：稱取10g樣品絞碎，加入pH7.4的PBS液15mL進行均質。振搖15min。於15℃、3500g離心10min。吸取5mL上層懸浮液轉移到另外一個離心管中，再加入5mL的庚烷，充分混勻5min。於15℃、3500g離心5min。將上部有機相（庚烷層）全部棄去，注意該過程中不要殘留庚烷。將下部水相層進行過濾除菌，取100μL的濾出液進行試驗。
④其他食品可酌情參考上述食品處理方法。
(3)檢測
①所有操作均應在室溫（20～25℃）下進行，A、B、C、D、E型金黃色葡萄球菌腸毒素分型ELISA檢測試劑盒中所有試劑的溫度均應回升至室溫方可使用。測定中吸取不同的試劑和樣品溶液時應更換吸頭，用過的吸頭以及廢液要浸泡到10%次氯酸鈉溶液中過夜。
②將所需數量的微孔條插入框架中（一個樣品需要一個微孔條）。將樣品液加入微孔條的A～G孔，每孔100μL。H孔加100μL的陽性對照，用手輕拍微孔板充分混勻，用黏膠紙封住微孔以防溶液揮發，置室溫下孵育1h。
③將孔中液體傾倒至含10%次氯酸鈉溶液的容器中，並在吸水紙上拍打幾次以確保孔內不殘留液體。每孔用多通道加樣器注入250μL的洗液，再傾倒掉並在吸水紙上拍幹。重複以上洗板操作4次。本步驟也可由自動洗板機完成。
④每孔加入100μL的酶標抗體，用手輕拍微孔板充分混勻，置室溫下孵育1h。
⑤重複③的洗板程序。
⑥加50μL的TMB底物和50μL的發色劑至每個微孔中，輕拍混勻，室溫黑暗避光處孵育30min。
⑦加入100μL的2mol/L硫酸終止液，輕拍混勻，30min內用酶標儀在450nm波長條件下測量每個微孔溶液的OD值。
(4)結果的計算和表述
①質量控製：測試結果陽性質控的OD值要大於0.5，陰性質控的OD值要小於0.3，如果不能同時滿足以上要求，測試的結果不被認可。對陽性結果要排除內源性過氧化物酶的幹擾。
②臨界值的計算：每一個微孔條的F孔和G孔為陰性質控，兩個陰性質控OD值的平均值加上0.15為臨界值。
示例：陰性質控1=0.08
陰性質控2=0.10
平均值=0.09
臨界值=0.09+0.15=0.24
③結果表述：OD值小於臨界值的樣品孔判為陰性，表述為樣品中未檢出某型金黃色葡萄球菌腸毒素；OD值大於或等於臨界值的樣品孔判為陽性，表述為樣品中檢出某型金黃色葡萄球菌腸毒素。
5.生物安全
因樣品中不排除有其他潛在的傳染性物質存在，所以要嚴格按照GB19489對廢棄物進行處理。
附B 金黃色葡萄球菌最可能數（MPN）檢索表
每克(毫升)檢樣中金黃色葡萄球菌最可能數（MPN）的檢索。