5.結果與計算
在標準視野下，發現有黴菌菌絲的長度超過標準視野（1.382mm）的1/6或3根菌絲的總長度超過標準視野的1/6（即測微器的1格）時，即為陽性（＋），否則為陰性（-）。按100個視野計，發現有黴菌菌絲體存在的視野數占視野總數的百分數，即為黴菌的視野百分數。
實驗十五 乳酸菌飲料中黴菌數的測定
一、實驗目的
（1）掌握食品飲料黴菌測定原理。
（2）進一步掌握稀釋分離的檢測技術。
（3）掌握黴菌計數的方法和檢驗技能。
二、實驗原理
由於受到黴菌的汙染，常常使乳酸菌飲料發生黴壞變質，有些黴菌的有毒代謝產物引起各種急性和慢性中毒，特別是有些黴菌毒素具有強烈的致癌性。
黴菌數的測定是指食品檢樣經過處理，在一定條件下培養後，所得1mL檢樣中所含的黴菌菌落數。黴菌數主要作為判定乳酸菌飲料被黴菌汙染程度的標誌。
三、設備和材料
恒溫箱（25～28℃）、振蕩器、天平、顯微鏡、具塞三角瓶（300mL）、試管（15mm×150mm）、平皿（直徑90mm）、吸管（1mL及10mL）、酒精燈、載玻片、蓋玻片、廣口瓶、牛皮紙袋（121℃滅菌20min）、試管架、接種針、橡皮乳頭。
四、培養基和試劑
馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂、孟加拉紅培養基、滅菌蒸餾水、乙醇、乳酸飲料樣品。
五、實驗程序與步驟
1.實驗操作程序
2.實驗操作步驟
(1)取樣時須特別注意樣品的代表性和避免采樣時的汙染。首先準備好滅菌容器和采樣工具，如滅菌牛皮紙袋或廣口瓶、金屬刀或勺等。樣品采集後應盡快檢驗，否則應該將樣品放在低溫幹燥處。
（2）取一瓶乳酸菌飲料，用自來水洗淨擦幹，放在無菌室，打開紫外殺菌燈照射30min，放到超淨工作台上。以無菌操作吸取檢樣25mL，放入含有225mL滅菌生理鹽水的玻璃三角瓶中，振搖30min，即為1∶10樣品勻液。
（3）用滅菌吸管吸取1∶10樣品勻液10mL，注入試管中，另用帶橡皮乳頭的1mL無菌吸管反複吹吸50次，使黴菌孢子充分分散。
（4）取1mL 1∶10稀釋液注入含有9mL無菌水的試管中，另換一支1mL滅菌吸管吹吸5次，此液為1∶100樣品勻液。
（5）按上述操作順序做10倍遞增稀釋液,每稀釋一次，換用一支1mL滅菌吸管,根據對樣品汙染情況的估計，選用3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時，吸取1mL稀釋液於滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿，然後將涼至45℃左右的培養基注入平皿中，待瓊脂凝固後，倒置於25～28℃的恒溫箱中，3d後開始觀察，共培養觀察5d。
（6）計算方法通常選擇菌落數在10～150之間的平皿進行計數，同稀釋度的2個平皿的菌落平均數乘以稀釋倍數，即為每克（或每毫升）檢樣中所含黴菌和酵母數。關於稀釋倍數的選擇可參考細菌菌落總數測定。
（7）報告每毫升食品所含黴菌和酵母數以個/mL表示。
六、實驗結果與報告
（1）將各稀釋平板上的菌落數填入表中。
（2）根據實驗結果“菌落計數報告”報告檢驗結果：
1mL乳酸菌飲料所含黴菌數是______。