2.大動物骨髓的采集犬等大動物骨髓的采集可采取活體穿刺法。動物麻醉後固定，局部脫毛，消毒皮膚，估計皮膚到骨髓的距離，把骨髓穿刺針的長度固定好，操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚拉緊，右手將穿刺針在穿刺點垂直刺入，穿入牢固後，輕輕左右旋轉穿刺針鑽入，當穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。犬骨髓的采集，一般采用髂骨穿刺。
犬等大動物常用的骨髓穿刺點：胸骨穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處；肋骨，穿刺部位是第5～7肋骨各自的中點；脛骨穿刺部位是內側脛骨頭下1cm處；髂骨穿刺部位是髂上棘後2～3cm的脊部；股骨穿刺部位是股骨內側，靠下端的凹麵處。如果穿刺采用的是肋骨，穿刺後要用膠布封貼穿刺孔，防止發生氣胸。
第十一節 實驗動物的急救措施
實驗中因麻醉意外、大失血、嚴重的創傷、窒息等各種原因，可使動物血壓急劇下降甚至測不到，呼吸極慢而不規則甚至停止，角膜反射消失等臨床死亡表現時，應立即進行急救，急救方法可根據動物情況而定。
1.注射強心劑靜脈注射0.1%腎上腺素1ml，必要時直接做心內注射，當動物注射腎上腺素後，如心髒已搏動但極為無力時，可從靜脈或心腔內注射1%氯化鈣5ml。此種搶救方法適用於犬、兔、貓等大動物。
2.注射呼吸中樞興奮藥每隻動物按一次靜脈注射25%尼可刹米1ml給藥，在動物呼吸抑製狀態下興奮呼吸作用更明顯。或每隻動物一次靜脈注射1%山梗茶堿0.5ml，該藥的呼吸興奮作用迅速而顯著，可使呼吸迅速加快加深，血壓亦同時升高。該方法適用於大動物。
3.動脈快速注射高滲葡萄糖液一般常采用經股動脈逆血流加壓、快速、衝擊式的方法注入40%葡萄糖液，可按2～3ml/kg量給大動物注入。注入後可刺激動物血管內感受器，反射性引起血壓、呼吸的改善。
4.動脈快速輸血、輸液一般在做大動物失血性休克或死亡複活等實驗時采用。可在動物股動脈插一軟塑料套管，連接加壓輸液裝置（血壓計連接輸液瓶上口，下口通過膠皮管連接塑料套管）。當動物發生臨床死亡時，即可加壓（180～200mmHg），快速從股動脈輸血和低分子右旋糖酐，如實驗前動物曾用肝素抗凝，由於微循環血管中始終保持通暢，不出現血管中血液凝固現象，因此就是動物出現臨床死亡數分鍾，采用此種急救措施仍能救活。
5.針刺針刺人中穴對搶救家兔效果較好。對犬用每分幾百次頻率的脈衝電刺激膈神經效果較好。
6.人工呼吸可用雙手有規律壓迫動物胸廓進行人工呼吸；也可行氣管分離插管後，連接電動人工呼吸器進行人工呼吸，一旦動物恢複自動呼吸，即停止人工呼吸，當動物呼吸停止，而心搏極弱或剛停止時，可用5%CO2和60%O2的混合氣體進行人工呼吸，效果更好。
采用人工呼吸器時，應調整其容量，大鼠為50次/min，每次8ml/kg（即400ml/（kg·min），兔和貓為30次/min，每次10ml/kg（即300ml/（kg·min），犬為20次/min，每次100ml/kg[即200ml/（kg·min）]。
如動物中毒或創傷較輕，僅出現輕度呼吸抑製或血壓下降，可適量選注呼吸中樞興奮藥，或給動物吸氧及針刺穴位，同時應注意動物保持體溫。
第十二節 常用實驗動物的處死、活檢、屍檢及處理
一、實驗動物的各種處死方法
動物的處死方法很多，通常根據實驗的要求而定，原則上應遵循動物安樂死的基本原則，即盡可能縮短動物致死時間，盡量減少其疼痛、痛苦。常用的處死方法有以下幾種。
（一）大鼠和小鼠
1.脊椎脫臼法右手抓住尾巴將動物放在鼠籠蓋或粗糙的表麵上向後拉，用左手拇指和食指用力向下按住鼠頭，使頸椎脫臼（脊髓與腦髓拉斷），動物立即死亡。
2.斷頭法此法適用於鼠類小動物。用剪刀在頸部將鼠頭剪斷，並使頸部對準容器，以免血液四濺。由於腦脊髓離斷且大量出血，動物立即死亡。
3.擊打法此法適用於大鼠、家兔等。抓住動物尾部，提起，用力摔擊頭部，或用木錘用力捶其後腦部，動物痙攣後即處死。
4.急性失血法常剪斷動物的股動脈，放血致死。如果正在做手術性或解剖性實驗，可剪斷頸動脈、腹主動脈或剪破心髒放血。可采用摘眼球法，右手取一眼科彎鑷，在鼠右或左側眼球根部將眼球摘去，並將鼠倒置；頭向下，大量失血而致死。
5.化學藥物致死法在一密閉容器內，預先放置浸有全身麻醉作用的乙醚或氯仿的棉花，將動物投入容器內，使動物吸入麻醉藥而致死。也可皮下注射士的寧（馬錢子堿），注射量為小鼠0.76～2.0mg/kg，大鼠為3.0～3.5mg/kg。
（二）犬、貓、兔、豚鼠
1.空氣栓塞法此法適用於較大動物的處死。向動物靜脈內注射一定量的空氣使之發生空氣栓塞，形成嚴重的血液循環障礙而死。兔、貓用此法處死需注入20～40ml空氣，犬致死的空氣劑量為80～150ml。一般注入後動物能很快死亡。本法的優點是處死方法簡單、迅速。缺點是由於動物死於急性循環衰竭，各髒器淤血十分明顯。
2.急性失血法先使動物麻醉、暴露股三角區或腹腔，再切斷股動脈或腹主動脈，迅速放血。放血時可用濕紗布擦，或用少量自來水衝洗切口，以保持其暢通，動物在3～5min 內即可死亡。采用此法動物十分安靜，對髒器無損害，但器官貧血比較明顯。
小鼠等小動物可采用頸總動脈大量失血而致死的方法。犬等大型動物要先麻醉後放血，要使放血的切口保持通暢，一般在股三角區橫切約10cm的切口，切斷股動、靜脈，動物因大量失血而死。
3.破壞延腦法對家兔可用木錘用力捶其後腦部，損壞延腦，動物痙攣後死亡。
4.化學藥物致死法
（1）靜脈注射10%氯化鉀溶液使動物心肌鬆弛，失去收縮能力，心髒發生急性擴張致心跳停止而死亡。成年兔由兔耳緣靜脈注入10%氯化鉀溶液5～10ml/隻，犬由前肢或後肢皮下靜脈注入20～30ml/隻，即可致死。
（2）靜脈注射4%甲醛溶液使血液內蛋白凝固，動物由於全身血液循環嚴重障礙和缺氧而死。犬用20ml/隻，即可致死。
（3）皮下注射士的寧致死用量，豚鼠為3.0～4.4mg/kg，家兔為0.5～1.0mg/kg，犬為0.3～0.42mg/kg。貓1.0～2.0mg/kg，大白鼠3.0～3.5mg/kg，小白鼠0.76～2.0mg/kg。
如果動物或其組織要送檢，必須注明處死方法。
（三）蛙類
常用金屬探針插入枕骨大孔，破壞腦脊髓的方法處死。將蛙用濕布包住，露出頭部，左手執蛙，並用食指按壓其頭部前端，拇指按壓背部，使頭前俯；右手持探針由凹陷處垂直刺入，刺破皮膚即入枕骨大孔。這時將探針尖端轉向頭方，向前深入顱腔，然後向各方攪動，以搗毀腦組織。再把探針由枕骨大孔刺入並轉向尾方，刺入椎管，以破壞脊髓。腦和脊髓是否完全破壞，可檢查動物四肢肌肉的緊張性是否完全消失。拔出探針後，用一小幹棉球將針孔堵住，以防止出血。操作過程中要防止毒腺分泌物射入實驗者眼內。如被射入時，應立即用生理鹽水衝洗眼睛。
二、實驗動物的活檢方法
1.肝髒活檢方法此種方法適用於實驗性肝炎標本的檢查。麻醉動物後，剃去胸及上腹被毛、消毒。在劍突下1cm處先用套管針刺入皮膚、肌肉和腹膜。然後，用特製注射針刺入，再用特製注射器將一定量生理鹽水注入腹腔，留少量液體在注射器內，反抽形成負壓。最後，將針頭與動物呈45°角，在動物呼氣時立即刺入肝髒，迅速抽取。當一條肝組織被抽至注射器內，立即拔出針頭，用紗布或海綿按壓針刺部位數秒鍾，防止皮膚、肌肉出血。將肝組織由注射器注入平皿，再轉至保存瓶內。
2.淋巴結活檢方法麻醉動物後，腹股溝或腋窩剃毛、消毒。然後，手術切開腹股溝淋巴結處1.0～1.5cm，鈍性分離，用血管鉗分離淋巴結。切勿直接夾住淋巴結，否則，會造成淋巴細胞擠壓現象。分離淋巴結後，去除周圍脂肪組織，用刀片輕輕切取，固定於中性4%甲醛液中，或切成小塊用2.5%戊二醛固定做電鏡標本，或直接投人液氮冷凍。觀察手術區無出血後，用絲線縫皮下組織、皮膚。皮膚切口最好再用乙醇消毒，然後將動物放回籠內，注意保溫。7天後拆去皮膚縫線。
3.骨組織活檢方法以猴為例，術前禁食12h，麻醉前用阿托品0.04mg/kg，做氣管插管和甲氧氯烷與氧混合氣體吸入麻醉，並使猴呈俯臥位。沿髂脊切開皮膚，逐層分離肌肉，達到髂脊，用片鋸鋸出1cm長髂脊，用骨鑿輕輕切除做活檢。鋸斷碎骨用鹽水衝洗，海綿壓迫止血。修複骨膜和筋膜，用水平墊縫合關閉臀肌第三層和表層肌肉及皮下脂肪組織。標本用紗布擦去骨鋸末，然後浸於70%乙醇固定，做切片。加強術後護理，防止感染。
4.陰道組織活檢方法以犬為例，選用改進的直腸鏡裝以冷光源作為陰道鏡使用，外徑15mm，長150mm（外刻度可顯示插入深度），內徑12.5mm，可以插入活檢鉗，並能觀察陰道黏膜變化。活檢鉗頭端略傾斜，裝在一個轉管杆上，用以係統觀察和定位取材。取材大小平均為2mm×1mm×1mm，固定於4%甲醛液中。每隻犬每2周可取材1次。
體重少於9kg的Beagle犬常不能用直腸鏡取材，特別是動物不處於發情周期、陰道黏膜無彈性時。此時可使用7cm的鴨嘴或陰道窺器，用可彎曲的纖維冷光源照明。
三、實驗動物的屍檢方法
實驗後對動物進行屍檢，是動物實驗中的一種重要方法。通過對實驗動物進行病理解剖觀察，分析死亡原因，對實驗結果進行判定等。
動物屍檢方法采用髒器聯合取出檢查法，因為它保持各髒器間的原有聯係，便於觀察病變在各髒器間的關係。此法是先取出胸腔髒器檢查，後取出腹腔髒器檢查。頭部器官的檢查可先於也可後於胸腔髒器檢查。具體屍檢方法如下。
（一）體表檢查
首先複查動物編號、性別和實驗分組，記錄死亡或活殺時間、解剖時間。然後檢查動物外形、年齡、胖瘦、毛色、皮膚出血情況，生殖器官病變情況等。有無屍冷、屍僵和腐敗現象，這對判斷死亡時間有重要意義。動物屍僵從頭至前、後肢直至全身，一般經12h左右。屍僵在死後1h自頭部開始發生，最先自下頜角開始，繼則在頸部肌肉，其後為胸和腹部肌肉，再次為上肢，最後到下肢。屍僵通常持續24h左右，以後逐漸消失。其屍解的程序亦是如此。故根據屍僵存在的部位可以推測死後經過時間。動物急性死亡的屍僵出現較早，而且僵直的程度較強，持續時間亦較久。屍僵受周圍溫度的影響，周圍氣溫較高時，屍僵開始較早，屍解較速；寒冷時則屍僵開始較晚，屍解也較遲。