采血時要注意采血場所有充足的光線;室溫夏季最好保持在25~28℃,冬季20~25℃為宜,采血用具和采血部位要消毒;若需抗凝血,應在注射器或試管內預先加入抗凝劑;所需采血量應控製在動物的最大安全采血量範圍內。
二、常用實驗動物的采血部位及方法
(一)大鼠和小鼠的采血方法
1.割尾采血需血量較少時采用此采血法。先將動物固定或麻醉,露出鼠尾,將鼠尾浸在45℃左右溫水中數分鍾或用乙醇塗擦鼠尾,使鼠尾血管充盈,然後擦幹鼠尾,用銳器(刀或剪刀)割去尾尖,小鼠1~2mm,大鼠3~5mm,讓血液順管壁流入試管或用血紅蛋白吸管吸取,為采取較多的血,可由手自尾根部向尾尖按摩。采血結束時,傷口消毒,並壓迫止血,也可用火燒灼(電器燒灼)止血或6%火棉膠塗敷止血。也可在尾部做一橫切口,割破尾動脈或靜脈,收集血液及止血方法同上。此種采血方法每鼠一般可采血10餘次以上,小鼠每次可取血0.1ml左右,大鼠可取血0.3~0.5ml。如方法合適,室溫較高,小鼠也可取血0.5ml以上,大鼠可取血3ml以上。
2.刺鼠尾采血法大鼠取血量很少時(僅做白細胞計數或血紅蛋白檢查),可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭,再用乙醇消毒和擦拭,使鼠尾充血,用7號或8號注射針頭,刺入鼠尾靜脈,撥出針頭時即有血滴出,一次可采集10~50mm3,如長期反複取血,應先靠近鼠尾末端穿刺,以後逐漸向近心端穿刺。
3.眼眶後靜脈叢取血左手抓鼠,固定好頭部,並輕輕向下壓迫頸部兩側,引起頭部靜脈血液回流困難,使眼球充分外突,眶後靜脈叢充血。右手持長為7~10cm的玻璃製采血管(毛細管內徑1~1.5mm,毛細管段長約1cm,另端漸擴大成喇叭形)或連接7號針頭的1ml注射器,使采血器與鼠麵成45°的夾角,將針頭刺入下眼瞼與眼球之間,輕輕向眼底部方向移動,在此處旋轉采血管以切開靜脈叢。把采血管保持水平位,稍加吸引,即可取出血液。當得到所需的血量後,即除去加於頸部的壓力,同時將采血器拔出,以防止術後穿刺孔出血。
小鼠、大鼠、豚鼠、家兔都可從眼眶後靜脈叢取血,根據實驗需要,可在數分鍾後在同一穿刺孔重複取血,一般兩眼輪換取血,小鼠每次可采血0.2~0.3ml,大鼠每次可采血0.5~1.0ml。
4.心髒采血該法適用於大鼠、豚鼠、兔。大鼠取血時將大鼠仰臥固定好,將心前區部位毛剪去,並用碘酒、乙醇消毒此處皮膚,在左側第3~4肋間,用左手食指觸摸心搏動處,右手取連接有4~5號針頭的注射器,選擇心搏最強處穿刺,當針刺入心髒時,血液自動進入注射器。也可由左手抓住大鼠,右手選擇心搏最強處後直接將針刺入心腔。心髒取血時最好一次刺中心髒,否則反複刺心髒,會引起動物死亡。
也可開胸采血,先將動物麻醉,打開胸腔,暴露心髒,用針頭刺入右心室,吸取血液,小鼠可取0.5~0.6ml,大鼠可取0.8~1.2ml。
5.摘眼球采血先將動物用左手固定,頭部稍向下傾斜,壓迫頸(背)部,使眼球突出並充血,用彎頭眼科止血鉗(或鑷子)迅速摘除眼球,並用鑷子捅破眼球後包膜。眼眶內很快流出血液,將血滴入預先加有抗凝劑的試管中,直至要求的血量。一般可取動物體重的4%~5%血液量。如取血時眼部血液凝固,可再摘取對側眼球,並擠壓胸腔,促使血液流出。該取血方法為一次性取血,取血後動物大多死亡。
6.頸靜脈或頸動脈采血將動物麻醉後背部固定,剪去一側頸部外側毛,解剖頸背,並分離暴露頸靜脈或頸動脈,用注射針沿頸靜脈或頸動脈平行方向刺入,抽取所需血量,此種方法小鼠可取血0.6ml左右,大鼠可取8ml左右。也可把頸靜脈或頸動脈剪斷,以注射器(不帶針頭)吸取流出來的血液,或用試管取血。
7.股靜脈或股動脈采血將動物麻醉後腹麵朝上固定,切開左或右腹股溝的皮膚,分離股靜脈或股動脈,將注射針平行於血管刺入靜脈或動脈內,徐徐抽動針栓,即可采血。也可不麻醉,先由另外一人固定動物,采血者左手拉直動物下肢,使靜脈充盈,右手用注射器刺入血管采血。一般小鼠可采血0.2~0.8ml,大鼠0.4~1.6ml。連續多次股靜脈采血時,則取血部位要盡量選擇離心端。
8.腹主動脈采血動物麻醉後仰臥固定,沿腹線皮膚切開腹腔,使腹主動脈暴露,用注射器吸出血液,也可用無齒鑷子剝離結締組織,夾住動脈近心端,用尖頭手術剪刀剪斷動脈,使血液噴入盛血器皿中。
9.斷頭采血左手拇指和食指從背部較緊地握住鼠頸部皮膚,並將動物頭部朝下,右手用剪刀猛剪鼠頸,剪斷1/2~4/5的頸部,讓血流入容器,小鼠可采血0.8~1.2ml,大鼠5~10ml。采血時應注意防止動物毛等雜物流入容器引起溶血。
(二)豚鼠的采血方法
1.耳緣剪口采血將耳消毒後,用銳器(刀或刀片)割破耳緣,在切口邊緣塗抹20%檸檬酸鈉溶液或1%肝素溶液,阻止血凝,則血可自切口自動流出,進入容器。此法采血0.5ml左右。采血後用消毒紗布壓迫止血5~10s。
2.心髒采血豚鼠背位固定,先用左手觸摸心髒搏動處,在心髒跳動最明顯處穿刺,一般在胸骨左緣第4~6肋間隙。若注射針正確地刺入心髒,血液隨心髒跳動進入注射器。心髒采血要快,以免血液在注射器內凝固。豚鼠也可以不固定,由另外一人握住前後肢進行采血。豚鼠采血時,一般應在麻醉下開胸直接從心髒采血。部分采血可取5~7ml,采全血15~20ml。
注意若認為針已進入心髒,但抽不出血時,可把針慢慢稍退出一點即可。如抽血失敗要拔出針再紮。在胸腔內針尖不能左右擺動,以防損傷心、肺,引起死亡。
3.背中足靜脈采血助手固定好動物,將其右或左後膝關節伸直提到術者麵前。術者將動物腳背用75%乙醇消毒,找出背中足靜脈後,以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手拿注射針刺入靜脈。拔針後立即出血,出血呈半球狀隆起,可用吸管或白細胞吸管吸血供實驗用。采血完畢,用紗布或脫脂棉壓迫止血。反複采血時,兩後肢應交替使用。
4.股動脈采血將動物仰臥位固定於手術台上,剪去腹股溝區的毛,麻醉後,局部用碘酒消毒。切開長2~3cm的皮膚,使股動脈暴露並分離。然後用鑷子提起股動脈,遠心端結紮,近心端用止血鉗夾住,在動脈中央剪一小孔,用無菌玻璃小導管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入,鬆開止血鉗,血液即由導管口流出,一次可采血10~20ml。
此外,還可用眼眶靜脈叢采血,頸靜脈采血等,方法參照大小鼠采血法。
(三)家兔的采血方法
1.心髒采血家兔仰臥固定,用左手觸摸心髒搏動處,選擇心跳動最明顯處做穿刺。穿刺部位是第3肋間隙,胸骨右緣3mm處,每次取血不超過20~25ml,應用此法可進行心腔內注射和取血,一般經6~7天後,可以重複進行心髒穿刺術。
2.耳緣靜脈采血將動物固定後,露出兩耳,選靜脈清晰的耳朵去毛,常規消毒,壓迫耳根部,使靜脈怒張或白熾燈稍烤片刻,即可用針頭穿刺靜脈采血。一次采血5ml左右。
如取少量血液做一般常規檢查時,可待耳緣靜脈充血後,在靠近耳中央部血管,用5號半針頭刺破血管,即從刺破口流出血液。
3.兔耳中央動脈采血將兔置於兔固定盒內,在兔耳的中央有一條較粗,顏色較鮮紅的中央動脈,用左手固定兔耳,右手取注射器,在中央動脈的末端,沿著動脈平行地向心方向刺入動脈,即可見動脈血進入針筒,取血後用藥棉壓迫止血。此法一次抽血可達15ml。取血用的針頭一般用6號針頭,不易太細,針刺部位應從中央動脈末端開始,不要在近耳部取血,因耳根部軟組織厚,血管位置略深,易刺透血管導致皮下出血。兔耳中央動脈易發生痙攣性收縮,因此抽血前,必須讓兔耳充分充血,當動脈擴張,未發生痙攣收縮前,立即進行抽血。
4.後肢脛部皮下靜脈采血將兔仰臥固定後(或由一人將兔固定好),拔去脛部被毛,在脛部上端股部紮以橡皮管後,在脛部外側淺表皮下可清楚見到皮下靜脈。用左手兩指固定好靜脈,右手取帶有5號半針頭的注射器由皮下靜脈平行方向刺入血管,抽動針栓如血進入注射器,即可取血。一次可取2~5ml。取血後用棉球壓迫取血部位止血,時間一般0.5~1min。如止血不妥,可造成皮下血腫,影響連續多次取血。
5.股靜脈、頸靜脈采血動物麻醉仰臥固定後做股靜脈或頸靜脈暴露分離手術。股靜脈采血時,注射器平行於血管,從股靜脈下端向心方向刺入,抽動針栓即可采血。外頸靜脈采血時,注射器由近心端(距靜脈分支2~3cm處)向頭側端順血管平行方向刺入,使注射針一直穿刺至主頸靜脈分支分叉處,即可采血,此處血管較粗,取血量較多,一般一次可取10ml以上。采血完畢後,應用幹紗布輕輕壓迫采血部位以止血。
(四)犬和貓的采血方法
1.後肢外側小隱靜脈和前肢內側皮下頭靜脈采血此種采血方法最為常用。後肢外側小隱靜脈在後肢脛部下1/3的外側淺表的皮下。采血時將犬固定在犬架上或使犬側臥,由助手將犬固定,將抽血部位毛剪去,碘酒、乙醇消毒,采血者用左手拇指和食指握緊剪毛區上部,使下肢靜脈充盈,右手用連有6號或7號針頭的消毒注射器迅速穿刺入靜脈,左手放鬆將針固定,以適當速度抽血(以無氣泡為宜)。也可將膠皮帶綁在犬股部或由助手握緊股部,即可。若僅需少量血液,隻需用針頭直接刺入靜脈,待血從針孔自然滴出,放入盛器或做塗片。
采集前肢內側皮下的頭靜脈血時,操作方法同上。一隻犬一般一次可采10~20ml血。
2.耳緣靜脈采血本法適用於取少量血的實驗。訓練過的犬一般不必綁嘴,剪去耳尖部短毛,即可見耳緣靜脈,用75%乙醇局部消毒後,用手指輕輕摩擦耳部,使靜脈擴張,用連有5號半針頭的注射器在耳緣靜脈末端刺破血管,待血液漏出采血或將針頭逆血流方向刺入耳緣靜脈采血,采血後用棉球壓迫止血。
3.頸靜脈采血犬不需麻醉,經訓練的犬不需固定,未經訓練的犬應固定,取側臥位,剪去頸部毛約10cm×3cm範圍,碘酒、乙醇消毒皮膚,將犬頸部拉直,頭盡量後仰,左手拇指壓住靜脈注入胸部位的皮膚,使頸靜脈怒張,右手取連有6號半針頭的注射器,針頭沿血管平行方向向近心端刺入血管。左手固定針頭,此法一次可取較多的血。但此靜脈在皮下易滑動,針頭刺入時要準確,針後用手固定。對易怒的犬取血時尚需對犬進行麻醉。
4.股動脈采血此法是犬動脈采血常用方法。對訓練的犬,在清醒狀態下將犬臥位固定於犬解剖台上,伸展後肢向外伸直,暴露腹股溝三角動脈搏動的部位,剪去毛,碘酒、乙醇消毒;左手中指,食指探摸股動脈跳動部位,並固定好血管,右手取連有6號半針頭的注射器,針頭由動脈跳動處直刺入血管,如未見血,可輕微轉動針頭或上下輕微移動針頭,血可自動進入針管。如刺入靜脈,必須抽出重新穿刺,抽血後,迅速拔出針頭。用幹消毒棉球壓迫局部2~3min以止血。
5.心髒采血犬麻醉後固定在手術台上,前肢向背側方向固定,暴露胸部,將左側第3~5肋間的毛剪去,碘酒、乙醇消毒皮膚,采血者用左手觸摸左側3~5肋間處,選心跳最明顯處進針,一般在胸骨左緣外1cm第4肋間處,取連有6號半針頭(或7號針頭)的注射器,向動物背側方向垂直刺入心髒,采血者可隨針接觸心跳的感覺,隨時調整刺入的方向和深度,擺動的角度應盡量小,避免損傷心肌過重,或造成胸腔大出血。當針頭正確刺入心髒時,血可自動進入注射器,此法可抽取多量的血液。
貓的采血方法與犬基本一致。常用的方法有前肢皮下頭靜脈、後肢股靜脈、耳緣靜脈采血,需較大量血樣時可從頸靜脈或心髒取血,方法同前。
(五)猴的采血方法
猴的采血方法與人相似,常用以下幾種方法。
1.毛細血管采血經局部消毒後,刺破猴拇指或足跟等處來采血,此法采血量較少。
2.靜脈采血取血量較大時采用靜脈采血,最宜部位是後肢皮下靜脈及外頸靜脈。外頸靜脈采血時,把猴固定於猴台上,側臥,頭部略低於台麵,助手固定猴的頭部與肩部,先剪去頸部毛,碘酒、乙醇消毒後,用左手拇指按住位於上頜角與鎖骨中點之間怒張的外頸靜脈,右手持連6號半針頭的注射器用人靜脈采血方法采血。采血後用藥消毒棉球壓迫局部止血。
也可在肘窩、腕骨、手背及足背選靜脈采血,但這些部位靜脈較細、易滑動,穿刺難,血流較慢,取血稍困難。後肢皮下靜脈的采血與犬相似。
3.動脈采血股動脈可用手觸及。取血量多時常被優先選用,采血方法同犬股動脈采血法。肱動脈與橈動脈也可采用。
(六)羊的采血方法
最常用的方法為頸靜脈采血法。將羊蹄捆縛,按倒在地,助手用雙手握住羊下頜,向上固定頭部,在頸部一側外緣剪毛約4cm×4cm,碘酒、乙醇消毒後,用左手拇指按壓頸靜脈,使之怒張,右手取連有粗針頭的注射器沿靜脈一側以30°傾斜由頭端向心方向刺入血管,然後緩慢抽血至所需量,取血後拔出針頭,采血部位以乙醇棉球壓迫片刻,同時迅速將血液注入盛有玻璃珠的滅菌三角燒瓶內,振蕩數分鍾,脫去纖維蛋白,防止凝血,或將血液直接注入裝有抗凝劑的三角燒瓶內。一般一次取血量可達50~100ml。此外,也可采用前、後肢皮下靜脈采血。
(七)雞、鴿、鴨的采血方法
1.翼根靜脈采血雞、鴨、鴿的常用采血法是從其翼根靜脈取血,采血時將動物翅膀展開,露出腋窩,將羽毛拔去,可見到由翼根進入腋窩的一條較粗靜脈,碘酒、乙醇消毒皮膚,然後左手拇指、食指壓迫此靜脈向心端,血管即怒張,右手取連有5號半針頭的注射器,針頭由翼根向翅膀方向沿靜脈平行刺入血管,即可抽血,一般可取10~20ml血液。
2.頸靜脈采血常用右側頸靜脈取血,因右側頸靜脈較左側粗,以食指和中指按住動物頭的一側,乙醇消毒右側靜脈部位,以拇指壓頸跟部以使靜脈充血,右手持注射器刺入靜脈采血。也可用刀片劃破頸靜脈直接采血。
3.其他采血法在爪根與爪中所見血管尖端之間切斷血管,常以吸管或毛細管直接采血。亦可將注射針刺入心髒內采血。