第22章 動物實驗的基本技術方法(一)(3 / 3)

注意:不能單提兩耳,易造成疼痛而引起掙紮。單提兩耳,捉拿四肢,僅抓背部或腰部會造成耳、腎、腰椎的損傷或皮下出血。

經口給藥時,可讓助手坐在椅子上,用一隻手壓住兩耳並抓住兔頸背部皮膚,不讓其頭部活動,用大腿夾住兔的下半身,用另一隻手抓住兩前肢將兔固定即可。

隻對兔的頭部進行操作時,如耳靜脈注射、采血、兔腦內接種、觀察兔耳血管變化等可用兔固定盒來固定頭部。

對兔進行測量血壓、手術時,可將兔麻醉後固定在實驗台(解剖台)上,拉直四肢,用棉繩固定在實驗台兩側,頭用固定夾固定,或用一根棉繩拴住兔的兩隻門牙,另一端固定在實驗台上即可。

五、犬的抓取與固定

犬的抓取方法較多。對未經訓練和調教的用於急性實驗的犬,因犬性凶惡,能咬傷人,因此進行實驗時可用特製的長柄鐵鉗固定犬的頸部,或用長柄鐵鉤鉤住犬頸部項圈,讓助手綁住犬嘴。馴服的犬固定時,可從側麵靠近輕輕撫摸其頸背部皮膚,用手將其抱住,然後由助手迅速用布帶綁住其嘴,用粗棉帶從下頜繞到上頜打一結,再繞回下頜打第二個結,然後將棉帶引至頭後頸項部打第三個結,在這結上再打一活結,捆綁鬆緊要合適。麻醉後應立即解綁,特別是乙醚麻醉時,容易發生鼻腔黏膜充血水腫阻塞氣道而造成窒息。

也可用特製的鉗或長柄犬夾夾住犬的頸部,但不要夾傷嘴和其他部位,夾住頸後,使犬頭向上,頸部拉直,然後套上犬鏈。

固定犬時要先固定頭部,再固定四肢。

慢性實驗時可將已馴服的犬拉上固定架上,將犬頭和四肢綁住,再用粗棉帶吊起犬的胸部和下腹部,固定在架的橫梁上,即可進行體檢、灌胃、取血、注射等實驗操作。

頭部固定:固定犬頭需用一特製的犬頭固定器,犬頭固定器為一圓鐵圈,圈的中央有一弓形鐵,與棒螺絲相連,下麵有一根平直鐵閂。操作時先將犬舌拉出,把犬嘴插入固定器的鐵圈內,再將平直鐵閂橫貫於犬齒後部的上下頜之間,然後向下旋轉棒螺絲,使弓形鐵逐漸下壓在動物的下頜骨上,把鐵柄固定在實驗台的鐵柱上即可。四肢固定時如果取仰臥位,四肢固定方法與家兔相同。

經過多次實驗的犬比較馴服,甚至還能配合實驗,這時不必強施暴力,可采取舒適的體位固定犬。

固定的姿勢一般采用仰臥位和腹臥位。仰臥位常用於做頸、胸、腹、股等部位的實驗,腹臥位常用於做背、腦脊髓的實驗。

六、貓的抓取與固定

已馴服的貓的抓取:伸手入籠抓貓肩部的皮膚將其提出,另一隻手抓住其前肢並托住毛,然後將其夾在腋下。注意防備貓的銳爪和牙會傷人。

未馴服的貓抓取時,一定要謹慎,先向貓打聲招呼,然後伸進一隻手,由頭至頸輕輕撫摸,抓住肩背部皮膚,將貓從籠中拖出,用另一隻手抓住腰背部皮膚,即可將貓抓住。

性情狂暴的貓抓取時可用布袋或網捕捉。抓取時要戴皮手套,以防貓的利爪和牙齒傷人。

固定可采用2種方法,一種是徒手固定,一種是固定架固定。前者需2人配合,先由一人抓住貓的頸背部皮膚,同時捏住2隻耳朵,不讓其頭部活動,用另一隻手抓住兩前肢,實驗者抓住兩後肢,將貓固定在實驗台上。或者由助手一隻手抓住貓的頸背部皮膚,另一隻手抓住貓腰部皮膚,將其按壓在台上。用固定架固定貓時,方法基本同兔。

七、豬的抓取與固定

先從背後緊抓豬的兩耳將其提起,使臀部著地,兩腿膝部合攏將其軀幹夾住,然後再仰放到“V”字形槽內進行固定,還可用木製三角固定架或布吊兜固定小型豬。用固定架時,使豬背臥,四肢用棉繩固定在三角架的四角邊上,也可用犬固定台。帆布吊兜要根據豬的大小設計成長方形的布兜,中央4層,4周8層,中央開5個口,以便插入四肢及排便。將布兜固定在木製固定架上,活動板上放便盆。如時間過長,可將活動板上升到豬可站立的高度,以減輕肢體的壓力。

八、羊的抓取與固定

羊是一種比較溫馴的動物,很容易抓取。一般隻需在羊脖子上戴上項圈,用繩牽著,便可抓住。固定時可用特製的羊固定架固定。該方法無需捆羊蹄,便於取血等實驗操作。

九、猴的抓取與固定

從籠內抓猴時,一定要有飼養人員配合,飼養人員應右手持短柄網罩,左臂緊靠門側,以防籠門敞開時猴逃出籠外。右手將網罩塞入籠內,由上而下罩捕。在猴被罩到後,應立即將網罩翻轉取出籠外,罩猴在地,由罩外抓住猴的頸部,輕掀網罩,用一隻手將猴的手臂反背握住,另一隻手將猴兩後肢捉住,即可將猴固定。

在室內或大籠內抓取時,需要2人合作,先用長柄網罩住,然後再按上述方法固定。

慢性實驗用的猴可讓其戴上鐵鏈條,抓取時,將鐵鏈抽緊固定於籠壁,反背其雙臂提出即可,也可用固定架固定猴。

十、蛙類的抓取與固定

蛙類抓取方法宜用左手將動物背部貼緊手掌固定,以中指、無名指、小指壓住其左腹側和後肢,拇指和食指分別壓住左、右前肢,右手進行操作。

在抓取蟾蜍時,應注意勿擠壓其兩側耳部突起之毒腺,以免毒液噴出射進眼中。

實驗如需長時間觀察,可破壞其腦脊髓(觀察神經係統反應時不應破壞腦脊髓)或麻醉後用大頭針固定在蛙板上,依據實驗需要采取俯臥位或仰臥位固定。

十一、鴿和鵪鶉的抓取與固定

一隻手從鴿(或鵪鶉)的前方,另一隻手繞到鴿的背後悄悄接近,兩隻手迅速將鴿捕住,捕住後以右手食指和中指夾住鴿的雙腳,以左手掌緊握從腹部到翼部的位置。

第四節 常用實驗動物的性別判定

一、小鼠、大鼠、沙鼠的性別判定

根據外生殖器(陰蒂或陰莖)與肛門之間的距離來判定這些動物新生仔的性別,一般間隔短的是雌性,間隔長的是雄性,但是對此判別要有一定經驗,成熟期雌性有陰道口,乳腺明顯,雄性有膨起的陰囊和陰莖。

二、豚鼠的性別判定

豚鼠的妊娠時間比較長,產下仔鼠有被毛,眼睛能睜開,有恒齒新生仔的性別也容易通過外生殖器的形態來判定。雌性外生殖器陰蒂突起比較小,用拇指按住這個突起,其餘指撥開大陰唇的皺褶,可看到陰道口,但是一定要注意,豚鼠的陰道口除發情期以外有閉鎖膜關閉著。雄性外生殖器處有包皮覆蓋的陰莖的小隆起,用拇指輕輕按住包皮小突起的基部,龜頭突出容易判別。

三、兔的性別判定

新生仔兔的性別判定比大鼠等困難。雌雄是根據肛門和尿道開口部之間的距離以及尿道開口部的形態來判別,肛門和尿道開口部之間的距離,雄性的是雌性的1.5~2倍。手指壓靠近尿道開口處的下腹部,雌性肛門和尿道開口部之間的距離不明顯伸長,尿道開口依然指向肛門方向;雄性則距離明顯伸長,尿道開口與肛門方向相反。尿道開口部的形狀,雌的是裂縫,細長形,雄的則是圓筒形。成年兔根據雌性陰道口的存在及雄性陰囊部膨脹和陰莖的存在相區別。

第五節 實驗動物的編號標記方法

動物在實驗前通常要分組,需將其標記加以區別。標記的方法有很多,良好的標記方法應滿足標號清晰、耐久、簡便、適用、無明顯損傷、無毒和易辨認等要求。常用的標記方法有染色法、耳緣剪孔法、烙印法、掛牌法等。

一、染色標記法

此標記方法在實驗室中最常使用,也很方便,常用化學藥品塗染動物背部或四肢一定部位的皮毛,代表一定的編號。常用的塗染化學藥品有如下幾種。①紅色:0.5%中性紅或品紅。②黃色:3%~5%苦味酸溶液。③咖啡色:2%硝酸銀溶液。④黑色:煤焦油乙醇溶液。

染色法對白色皮毛動物如大耳白兔、大白鼠和小白鼠都很適用。常用的染色方法有:①直接用染色劑在動物被毛上標號碼。此法簡單,但如果動物太小或號碼位數太多,就不可能采用此法。②用一種染色劑染動物的不同部位。其慣例是先左後右,從上到下。其順序為左前腿1號,左腹部2號,左後腿3號,頭部4號,腰部5號,尾根部6號,右前腿7號,右腰部8號,右後腿9號。③用多種染色劑染動物的不同部位。可用一種顏色作為十位,一種顏色作為個位,配合兩法,交互使用可編到99號。比如要標記12號就可以在左前腿塗上紅色,左腹部塗上黃色。

染色法簡便、清晰,適用於短期試驗。如要做長期實驗,避免褪色,每隔2~3周可重染一次。

也可用鼠尾標記法編號,用苦味酸或其他染色劑塗畫在鼠尾部。

可用剪子在耳朵不同部位剪一缺口或用打孔器打一小孔表示號碼,此方法常在飼養大量動物時作為終生號采用。特別注意的是打孔後要用消毒滑石粉抹在打孔局部,以免傷口愈合後辨認不出來。

三、烙印法

用刺數鉗在動物耳上刺上號碼,然後用棉簽蘸著溶在乙醇中的墨黑在刺號上加以塗抹,烙印前最好對烙印部位預先用乙醇消毒。

四、掛牌法

用金屬製的號牌固定於實驗動物的身上或籠門上,金屬號牌可固定於動物耳上,大動物可係於頸上。金屬號牌應選用不鏽鋼等對動物局部組織刺激小的金屬製造,如不鏽鋼。

對猴、犬、豬等大動物有時可以不做特別標記,隻記錄它們的外表和毛色特征即可。

第六節 實驗動物的被毛去除方法

動物的被毛常能影響實驗操作和實驗結果的觀察,因此實驗中常需去除或剪短動物的被毛,有時需標號或區別動物時也需剪毛或脫毛。常用的去毛方法有剪毛、拔毛和脫毛3種。

一、剪毛法

剪毛前先將動物適當固定,然後在選定部位先用剪刀小心將毛剪短,再用理發用的推剪或電動剃須刀沿皮緣修理,注意勿損傷皮膚。剪毛時需注意以下幾點:①應把剪刀貼緊皮膚剪毛,必要時用拇指和食指拉緊皮膚剪毛,不可用手提起被毛,以免剪破皮膚;②依次分批剪毛,不要亂剪;③剪下的毛集中放在一個容器內,容器內加水以防剪下的毛亂飛,勿遺留剪下的毛在手術部位或實驗環境中,以免剪下的毛影響實驗。

二、拔毛法

用拇指和食指將所需部位皮毛拔出,兔耳緣靜脈注射或取血時以及給大、小鼠做尾靜脈注射時常用此法。拔毛不但暴露了血管,又可刺激局部組織,起到了擴張血管利於操作的作用。也可用膠布或醫用橡皮膏在去毛部位反複輕貼輕拉去毛。這些去毛方法簡便,但毛囊易受損,一般需觀察1~2天再進行實驗。

三、脫毛法

脫毛係指用化學藥品脫去動物的被毛,適用於無菌手術視野的準備以及觀察動物局部皮膚血液循環和病理變化。常用脫毛劑的配方如下。

配方一:硫化鈉3g,肥皂粉1g,澱粉7g,加水適量調成糊狀。

配方二:硫化鈉8g,澱粉7g,糖4g,甘油5g,硼砂1g,加水75ml。

配方三:硫化鈉8g,溶於100ml水中。

以上脫毛劑配方適用於家兔、大白鼠、小白鼠等小動物的脫毛。

配方四:硫化鈉10g,生石灰15g,溶於100ml水內,此配方適用於犬等大動物的脫毛。

目前市場上有不少脫毛化妝品,動物脫毛效果也較理想,且多無明顯刺激及過敏現象。常用的有:①四肢淨膚露,由中日合資大寶日化有限公司生產(編號為Q/SB0108-90);②第二春亮膚露(脫毛霜),由上海第九製藥廠生產〔廠址上海市康定路528號,(90)衛妝準字06-XK-0038號〕;③四方牌特效脫毛露(中國鄭州華康日化廠出品)等。

使用上述各種脫毛劑時,都應在事先將皮毛剪短,以節省脫毛劑,並減少對皮膚的刺激反應。應用脫毛劑時用棉球蘸上脫毛劑薄層塗在脫毛局部或直接將脫毛劑塗在需脫毛局部,一般2~3min後,用溫水清洗脫毛局部,以紗布擦幹局部,塗一層油脂即可。也可按市售脫毛霜所附說明書進行脫毛。記住切不可用水浸潤被毛,否則脫毛劑會順被毛流入皮內毛根深處,損傷皮膚。

去毛的部位視不同動物及實驗要求而定。常選用背部正中線兩側,大鼠、小鼠有時也選用腹部,去毛的麵積取決於實驗的要求和動物的大小,常用麵積為小鼠1.5cm×2cm,大鼠和豚鼠約4cm×4.5cm,兔約為10cm×15cm。