7.序貫設計序貫設計係循逐個的進行實驗，適用於能在較短時間內做出反應的受試物。可同時用作圖或查表法隨機了解統計結果，一旦達到所規定的標準，即可停止實驗，做出結論。序貫設計所用的時間較長，因此隻適用於作用出現快（幾分鍾或幾小時內）的受試物和供應數量受限、價格高的大動物實驗，還適用於病例數稀少的臨床研究。
8.優選法設計優選法設計是一快速、簡便的選擇最優條件的方法。優選設計有多種，動物實驗中常用“單因素優選法”來選擇最優的濃度、劑量等條件。
第二節 動物實驗前的準備
一、樣本與劑量
（一）樣本的確定
實驗的樣本數反映在動物實驗上就是同一處理條件使用的動物數，在其他實驗中則根據實驗方法不同確定必要的樣本數。確定實驗的重複數首先要考慮的是獲得可靠的結論，其次是使用最少例數，即最大效果和最小成本。確定動物實驗的樣本數主要根據2種方法，一是根據經驗估計法，即在已有資料和經驗的基礎上，根據實驗的類型和特點，估計實驗所需要的例數。在應用估計法確定實驗的樣本數時，需要留有一定的餘地，以保證實驗的成功。
1.根據經驗估計法選取的樣本數
（1）小動物（如小鼠、大鼠、魚、蛙）每組應為10～30例。獲取計量資料進行2組對比時，每組應不少於10例；獲取計數資料時，每組不少於30例。
（2）中等動物（如兔、豚鼠）每組8～12例。獲取計量資料時，每組應不少於6例；獲取計數資料時，每組應不少於20例。
（3）大動物（如犬、貓、猴、羊）每組一般5～10例。
以上數據是根據一般情況估計的樣本數，在實際工作中，還要根據具體實驗的性質、觀察指標的特點來確定具體數據。如果觀察指標特別明顯並且非常穩定的實驗，所需的樣本數就可以適當減少。
2.計算法計算法是根據統計學原理進行測算的方法。這種測算法應具有一定的實驗基礎，或是已有的參考結果或預實驗的結果，並考慮該實驗所要求的精確度，最後確定樣本數。
對於體外實驗方法或其他實驗方法，可以根據實驗性質的不同，確定樣本數。確定的樣本數的基本要求是在符合統計學原理的前提下，能夠獲得肯定的實驗結論。
（二）劑量的確定
為觀察某種受試物對動物的作用，劑量的準確與否是個很重要的問題。劑量太小，作用不明顯；劑量太大，又可能導致動物中毒死亡。推薦使用下列方法確定劑量。
1.先用少量小鼠粗略的摸索中毒劑量或致死劑量，然後用中毒劑量或致死劑量的若幹分之一作為應用劑量，一般可取1/10～1/15.
2.確定劑量後，如第一次實驗的作用不明顯，動物也沒有中毒的表現（體重下降、精神不振、活動減少或其他症狀），可以加大劑量再次實驗；如出現中毒現象，作用也明顯，則應減少劑量再次實驗。在一般情況下，在適宜劑量範圍內，受試物的作用常隨劑量的加大而增強。所以，有條件時最好同時用幾個劑量做實驗，以便迅速獲得關於受試物作用的較完整的資料。如實驗結果出現劑量與作用強度毫無規律時，則更應慎重分析。
3.用大動物進行實驗時，開始的劑量可采用鼠類劑量的1/15～1/2，以後可根據動物的反應調整劑量。
4.確定給予動物的受試物劑量時，要考慮動物的年齡大小和體質強弱。一般來說，確定的受試物劑量是指成年動物的，如果目標動物是幼齡動物，劑量應適當減少。
5.確定動物給藥劑量時，要考慮因給藥途徑不同，所有劑量也不同。若口服量為50ml，灌胃量應為100～200ml，皮下注射量為30～50ml，肌內注射量為25～30ml，靜脈注射量為25ml。
二、預實驗與篩選
（一）預試驗
預實驗又稱預備實驗，是指在正式動物實驗前進行的初步實驗。其目的在於檢查各項準備工作是否完善，實驗方法和步驟是否切實可行，測試指標是否穩定可靠，初步了解實驗結果與預期結果的距離，從而為正式實驗提供補充、修正的意見和經驗。預實驗是動物實驗必不可少的重要環節。預備實驗可使用少量動物進行，實驗方法和觀測指標和正式實驗一樣。但是，預實驗的結果不能歸入正式實驗的最後結果中一同分析。
1.預實驗預達到的目的預實驗著重應解決以下問題：修正實驗樣本的種類和例數；檢查實驗的觀察指標是否客觀、靈敏和可靠；改進實驗方法和熟悉實驗技術；探索受試物劑量大小和反應關係，確定最適受試物劑量；發現進一步研究的線索；完善實驗方案。
2.預實驗中應注意的問題
（1）實驗穩定性變異係數越小，說明實驗波動越小，實驗的重複穩定性越好。變異係數公式如下：CV=S√x。例如，預試某藥降壓強度，用貓實驗時降壓強度為4.0±0.7kPa，用兔則為3.3±1.2kPa，變異係數分別為0.17和0.30.顯然前者穩定性較大，用貓較好。
（2）實驗靈敏性計算因變係數，因變係數越小，實驗靈敏度越好。因變係數：
CⅠ=（E2-E1）/（lgD2-lgD1）
D1，D2為有效量，E1，E2為藥效強度。例如，利尿藥預試中用生理鹽水5ml/100g做水負荷時，利尿藥劑量由2mg/kg增到4mg/kg時，每小時尿量由12.4ml增到19.6ml。用自來水為負荷時，同樣的藥量，尿量由15.6ml增到20.9ml。計算因變係數，前者較大，故選用生理鹽水為水負荷較好。
（二）篩選
篩選是在預實驗或既往經驗（已知反應率或反應強度）的基礎上，用少量動物對多數受試物進行試驗。一般以P＜0.1為篩選合格標準，以免漏篩有價值的受試物。具體的篩選試驗有以下幾種。
1.保護試驗篩選有毒藥時，常將各解毒藥與毒劑的半數致死量（LD50）合用，連用4隻動物，如均不死亡表示該藥篩選合格（P＜0.1）；如有1隻死亡，可加試3隻，若不死，也為篩選合格。總之，當死亡數為0/4，1/7，2/9，3/12，4/14時均可認為篩選合格。當然，篩選合格表示值得進行正式試驗，不一定正式試驗必定有良好效果。
2.概率判別試驗本法應用範圍更廣，對幾隻動物用藥檢測其陽性反應數，就可根據概率論推算出該藥陽性率的大致情況。
例1已知某法的致驚率為60%。現篩選抗驚厥藥，連用3隻均未出現驚厥，可認為該藥篩選合格，即用藥後驚厥率小於60%，P＜0.1.
例2欲篩選療效在60%以上的藥物。如連用5隻僅1隻有效，該藥可以篩棄（陽性率＜60%，P＜0.1.連用5隻均有效，該藥篩選合格，該藥篩選合格（陽性率＞60%，P＜0.1）。
例3篩選鎮咳藥，老藥的小鼠LD50對貓鎮咳ED50之比為20，現以比值不小於20者為值得正式試驗的篩選標準，應如何安排篩選試驗？
先測出各藥的小鼠LD50，分別用其1/20量進行4隻貓的鎮咳試驗，如均有效（或6/7，7/9有效），說明該藥小鼠LD50與貓鎮咳ED50的比值大於20，P＜0.1，錯誤篩取的可能性小於10%。反之，如均無效，可篩棄該藥，錯誤篩棄的可能性小於10%。
第三節 實驗動物的抓取與固定
抓取和固定是動物實驗操作中一項最基本的技術，正確的抓取和固定要做到：不損害動物健康，不影響指標觀察，不被動物咬傷，並且保證實驗能夠順利進行。
動物害怕陌生人，對各種刺激有一定的防禦能力。故在抓取、固定前，應先了解動物的生活習性。抓取時動作要大膽、迅速、熟練、準確，爭取在動物感到不安之前抓取並固定好。下麵介紹常用實驗動物的抓取和固定方法。
一、小鼠的抓取與固定
小鼠屬小型齧齒類動物，性情溫馴，一般不會主動咬人，但若抓取不當也容易被咬傷，所以，抓取時動作要輕緩，先用右手抓住鼠尾提起，然後將其放在鼠籠蓋或粗糙的平麵上，向後拉，鼠向前掙紮時，迅速用左手的拇指和食趾抓住其頭頸部的皮膚，把鼠體置於左手心中，用左手無名指和小指壓緊鼠尾和後肢、11-2.右手即可進行各種操作，如皮下、肌內或腹腔注射、灌胃及其他實驗操作。
有經驗者可徒手固定。直接用左手的拇指和食指捏住鼠尾，提起小鼠置籠蓋上，待其向前爬行時，將鼠尾移至小指和小魚際肌間夾住，騰出左手的拇指和食指順鼠背向前移，迅速捏住兩耳和頸部皮膚，中指捏住背部皮膚，並調整好動物在手中的姿勢，即可進行實驗操作。
進行解剖、外科手術、心髒采血時，需將小鼠固定，可取一塊邊長15～20cm的木板，在板的前方邊緣紮1根針頭或釘入1根釘子，左右邊緣各釘入2個釘子，消毒後使用。將小鼠麻醉後，再用線繩將鼠頭部及四肢依次固定在木板上。
尾靜脈取血或注射時，可用小鼠直接鑽入固定架裏，也可采用一種簡易的辦法。即倒放一個燒杯或其他容器，把小鼠放在裏麵，隻露出尾巴，然後用乙醇擦拭，或者尾部用45～50℃ 的溫水浸潤幾分鍾以便暴露血管，進行注射或采血。這種容器或燒杯的大小、重量要適中，既能夠壓住鼠尾，不讓其活動，同時又起到壓迫血管的作用。或把小鼠放在一小黑布口袋內，小鼠趨黑，向前爬動，在尾部將小布口袋縮口，固定小布口袋後，可進行尾部靜脈注射或尾靜脈采血等操作。
抓取時要注意：用力過度，易使動物窒息或頸椎脫臼；用力過小，動物頭部能反轉過來咬傷實驗者的手。因此實驗者必須反複練習，熟練掌握。
二、大鼠和沙鼠的抓取與固定
大鼠的牙齒尖銳，容易咬人，不易用襲擊方式抓取，另外，大鼠在驚恐或激怒時易咬傷手指，提拿時最好戴上防護手套。4～5周齡以內的大鼠和小鼠一樣，抓住尾部提起來，周齡較大的大鼠尾部皮膚因為角質化容易被剝脫，所以用左手從背部中央到胸部捏起來抓住。
輕輕抓住尾巴提起，置於粗糙的平麵或籠蓋上，張開虎口，迅速將拇指、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其餘三指及掌心握住大鼠身體中段，並保持仰臥位，調整左手拇指抵在下頜骨上，即可進行操作。
尾靜脈取血或注射時，可將大鼠放入固定盒內，或者倒放一個燒杯或其他容器，隻留尾巴，進行操作。
如需長時間固定操作，可將麻醉的大鼠取仰臥或俯臥，四肢固定在木板或泡沫板上，用膠布纏粘四肢，再用針透過膠布紮在泡沫板上，固定好四肢，或用棉線紮腿固定好四肢。為防止大鼠蘇醒時咬傷人和便於頸、胸部等實驗操作，要用一根棉繩拉住大鼠的兩隻上門齒固定在其頭部後麵的木板上。
三、豚鼠的抓取與固定
豚鼠性情溫馴，一般不咬人，但因膽小易驚，不宜強烈刺激，抓取時，要穩、準和迅速。抓取幼小豚鼠時，用兩手捧起來，成熟動物則用手掌迅速扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上方，拇指、食指環扣頸部，另一隻手托住臀部。如果在實驗過程中，豚鼠掙紮頻繁，避免用此法，因為該法容易引起豚鼠窒息。
2個人配合操作，先由助手用左手的食指和中指卡住豚鼠頸背部兩側，拇指和無名指卡住肋部，分別用手指夾住左右前肢，抓起來。然後反轉左手，用右手的拇指和食指夾住右後肢，用中指和無名指夾住左後肢，使鼠體身直成一條直線。也可坐下來，用大腿夾住豚鼠的後肢，右手進行實驗操作。
也可用固定器固定豚鼠，將豚鼠四肢用線繩固定在木板或泡沫板上，方法和大、小鼠基本一樣。
四、兔的抓取與固定
家兔性情比較溫馴，不會咬人，但腳爪較尖，掙紮時極易抓傷操作人員。因此，必須防備其四肢的活動。
抓取時，應輕輕打開兔籠門，不要讓兔受驚，然後右手伸入籠內，從兔頭前部把兩耳輕輕壓於手掌內，兔便臥伏不動，此時將頸背部被毛和皮膚一起抓住提起，並用左手托住兔腹部，使其體重主要落在這隻手上，拿到兔籠外。
進行皮下、腹腔、肌內注射或測肛溫時，隻需將家兔抓牢或按住即可，抓兔的方法是用右手把兩耳輕輕地拿在手心，同時抓住頸後部的皮膚，然後用左手托住臂部，使兔的體重大部分落在左手上。