5、標準曲線的製備 精密吸取對照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml分別置於10ml容量瓶中,用稀乙醇稀釋至刻度,搖勻;分別精密吸取10μl,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定峰麵積,並以芍藥苷的進樣量(μg/μl)為橫坐標,相應的峰麵積(A*105)為縱坐標繪製標準曲線,其回歸方程為:Y=2.648×106X+5.553×103,相關係數r=0.9991。結果表明:芍藥苷進樣量在0.25μg~2.5μg範圍內與峰麵積呈良好的線性關係。
6、回收率試驗 精密吸取已知含量的當歸養血口服液1.0ml,準確加入一定量的芍藥苷,按2.2項“供試品溶液的製備”方法製成供試品溶液,再按“含量測定方法”依法操作,回收率為98.76%,RSD=1.53%。
7、樣品中芍藥苷含量測定 取對照品溶液(0.05mg/ml)與供試品溶液,用0.45μm微孔濾膜濾過後,按上述的色譜條件分別精密進樣20μl,測定峰麵積。根據標準曲線換算求得各樣品中芍藥苷含量,由此確定正交試驗的含量測定方法。
8、結果分析可知,當歸養血口服液的水提工藝條件以A3B1C3為佳,即加10倍量水煎煮3次,60min/次,同時提示,影響水提效果的主要因素是提取次數,其次是加水量,煎煮時間影響最小,為驗證直觀分析結果,我們對實驗數據進行了方差分析,結果提取次數對水提效果的影響具有十分顯著性意義,這與直觀分析結論也是相同的。
9、驗證實驗 按上述確定的最佳工藝條件進行驗證。3份,按最佳工藝條件進行重複性試驗,測得芍藥苷的含量分別為0.931 2mg/ml、0.934 7mg/ml、0.930 6mg/ml,與正交表中的試驗結果比較,認為驗證結果較為滿意。因此,確認當歸養血口服液的水提最佳工藝條件為加10倍量水煎煮3次,60min/次。
三、討論
通過對當歸養血口服液的水提工藝進行研究,確定了最佳工藝,即先將當歸、川芎、白術等藥材進行水蒸氣蒸餾提取揮發油,然後將藥渣及其他藥材(阿膠除外)以水為溶媒進行煎煮,加10倍藥材量的水煎煮3次,60min/次,在驗證試驗中所得芍藥苷的含量與正交試驗中所得芍藥苷的含量基本一致,表明優選出的水提工藝為最佳提取工藝。本品是在古方“八珍湯”的基礎上加味改劑型製成的中藥製劑,由補氣健脾之四君子湯與補血調血的四物湯,再加入黃芪和阿膠配合組成的氣血雙補方,方中用黨參、黃芪、熟地補氣血為主藥,輔以白術、茯苓益氣健脾燥濕;當歸、阿膠、白芍養血和營;川芎行氣活血,甘草和中益氣、調和諸藥。藥理研究表明本品具有強心、興奮造血係統、調節子宮機能等作用。
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