此外,Chie-Chien等在雞的心肌、骨骼肌等肌肉組織中發現了編碼。α-亞基和βA一亞基的mRNA;在小腸肌肉中也檢測到了βA一亞基的mRNA。Chie-Chien等還發現編碼INH各亞基的mRNA存在於甲狀腺、肝和肺等組織中;腎上腺和脾髒是成年母雞體內INH的又一來源,這與曾經以鼠為研究對象獲得的結果相一致。
3INH的分子克隆
3.1β一亞基的克隆
用作免疫原的EVH通常是從動物的卵泡液中分離純化而獲得的。由於鳥類沒有卵泡液,這使得直接獲取鳥類INH免疫原變得十分困難。隨著對鳥類INH的分子結構、特性及功能的逐步了解,現常采用分子克隆的手段來製取鳥類INH產品。
α-亞基具有種屬特異性,它在各物種中存在約80%的氨基酸同源性。以豬α-亞基的DNA為探針,曾從雞顆粒細胞總RNA提取物中獲得一段全長1.7kb的mRNA核苷酸序列。現利用豬α-亞基的mDNA序列已篩選出雞顆粒細胞中RNA的文庫,並獲得全長1586bp、含α-亞基全部讀碼框的一段克隆。
在對雞體內INH及其相關蛋白的研究中發現,以前體形式會成的α-亞基,經過再加工後才具有生物活性。成熟的。亞基多肽,其糖基化位點、半胱氨酸在多肽鏈中的排布方式與哺乳動物極為相似。雞卵巢中各級大卵泡的顆粒層細胞是合成和分泌。亞基的主要場所。Chen等的研究發現,α-亞基的表達豐度隨卵泡的發育而下降,在試驗中,F1卵泡中的α-亞基表達水平顯著低於FS卵泡,這與早期研究結果相同。
3.2βA-亞基的克隆
篩選βA一亞基cDNA所使用的探針為鼠的INHcDNA探針。βA-亞基的cDNA克隆全長8.4kb,其中的1540bp編碼βA-亞基。雞βA-亞基cDNA序列與哺乳動物的cDNA同源性很高,其氨基酸同源性高達98%。運用獲得的βA-亞基cDNA克隆,Chen等研究了F1-F5各級卵泡中βA-亞基的表達豐度。結果發現,βA-亞基與α-亞基在各級卵泡中的表達量成負相關關係,也即隨著卵泡的發育,βA-亞基在其中的表達水平逐漸升高,卵泡中βA-亞基最豐富。
βA-亞基,特別是其C-端成熟區,在進化上非常保守,故βA-亞基的cDNA克隆有望在今後研究基因的表達和調控、激素的作用、雞INH/ACY受體及其相關蛋白結構的分析過程中發揮重要作用。
3.3βB-亞基的分子克隆
在90年代初已篩選出鳥類INH/ACTβB-亞基的部分cDNA克隆。可由於體內βB-亞基的表達水平非常低,故有關βB-亞基的表達調控及表達水平的研究報道很少。目前利用以亞基cDNA的部分序列經RTPCR擴增後,獲得了篩選顆粒細胞內β-亞基cDNA文庫的同源探針。分析所獲得的內β-亞基的cDNA文庫,獲悉雞內β-亞基的成熟區多肽段與哺乳動物約有95%的氨基酸同源性,核苷酸同源性約為80%。
βB-亞基在各級卵泡顆粒層細胞中的表達差異不顯著。運用同源cDNA探針技術,對小黃卵泡及公雞睾丸內即βB-亞基mRNA轉錄水平的研究表麵,βB-亞基在小卵泡中的表達最豐富,這說明,βB-亞基可能參與早期卵泡的征集和發育過程。
4雞INH的生理作
4.1在母雞生殖中的作用
許多研究表明,鳥類INH的生物學作用與其在哺乳動物體內的作用類似。主要參與垂體水平FSH合成和分泌的調控過程。FSH是由垂體分泌的促性腺激素,它能促進卵泡的早期生長、分化以及使晚期卵泡進一步發育成熟。INH則抑製FSH的分泌,使血液循環係統中的FSH保持一定的水平。手術移去雞卵巢中卵泡和小黃卵泡,雞體內INH水平顯著下降,相應血清中FSH的水平則顯著升高,但血清LH的變化不顯著,這充分說明了INH對FSH的負反饋調節作用。
Wang等價別研究了低產蛋雞(連續產蛋期為3-7d)和高產蛋雞(21d)體內βB-亞基的表達情況。結果發現低產蛋雞卵巢卵泡的顆粒層細胞中WIHβ-亞基的表達水平高於同期的高產蛋雞,而且低產雞血中INH的濃度也高於高產蛋雞,但Wang等在試驗中沒有觀察到血清中FSH的變化情況。這說明高濃度的INH可能通過旁分泌的作用,調節卵泡類固醇的生成及各級大卵泡的發育,前體β-亞基可能通過競爭受體的機製來調控。FSH的生物活性。