3.1.2色譜條件的建立與甾醇色譜峰的指認本實驗采用HPLC-DAD-ELSD串聯分析，以樣品的DAD與ELSD色譜圖結合全波長掃描信息，排除非甾醇色譜峰（無紫外吸收）的幹擾，確定流動相組成比例;同時以β-穀甾醇、豆甾醇為對照，指認出經酸水解、皂化後，全部遊離態甾醇色譜峰集中於色譜圖上一定的範圍（僅有β-穀甾醇、豆甾醇，未發現其他明顯的峰）。由於豆甾醇對照品的純度低，不能作為含量測定用，且樣品中豆甾醇含量較低，故阿薩伊油中總甾醇的含量計算采用各甾醇色譜峰峰麵積加和，以β-穀甾醇計。本研究先後對色譜柱種類（ODS C18，C8柱），流動相的組成（甲醇-水95∶5，90∶10，80∶20;乙腈-異丙醇60∶40，70∶30，80∶20），蒸發光散射檢測器漂移管溫度霧化器流速等參數進行優化，靈敏度、重複性好，各色譜峰分離良好，分析時間適中，滿足連續進樣的要求。
本研究測定了3批阿薩伊凍幹粉中提取的阿薩伊油中植物甾醇的含量，阿薩伊中的植物甾醇以β-穀甾醇為主，還有少量豆甾醇。已有研究采用氣相色譜法測定阿薩伊中植物甾醇的含量[2]，本研究建立了高效液相色譜法檢測阿薩伊油中植物甾醇的含量，檢測結果與上述氣相色譜法測定結果基本一致。本研究所建立的供試品前處理方法以及檢測方法為植物甾醇類成分含量測定提供了參考。
3.2抗氧化活性的測定
本研究采用總氧自由基清除能力（TOSC）的方法對阿薩伊油的抗氧化活性進行評價，測定原理及定量方法根據Winston等建立的方法[6-7]，ABAP在35℃時可熱解產生氧自由基，KMBA在氧自由基的作用下會氧化產生乙烯，而抗氧化劑存在時可與KMBA競爭與氧自由基結合而使乙烯的產生減少，從抗氧化劑存在或缺乏時乙烯產生的差別可計算所測定樣品中存在的抗氧化劑的總量。TOSC方法最大的優越性是其所測定的抗氧化能力包含了任何可與氧自由基結合的物質所發揮的作用，因而反映的是機體所具有的總抗氧化能力，這是單項抗氧化劑指標所無法比擬的。
結果顯示供試品的TOSC與其濃度呈正相關，樣品濃度和抗氧化能力具有較好的劑量-效應關係。以抗氧化劑還原性穀胱甘肽做對照，當質量濃度為0.1g·L-1時，阿薩伊油的TOSC值（抗氧化能力）相當於還原型穀胱甘肽的20%;當質量濃度大於6g·L-1時，阿薩伊油的TOSC值（抗氧化能力）相當於還原型穀胱甘肽的80%以上，表明在相對高濃度時阿薩伊油具有顯著的抗氧化能力。
本研究以南美草藥阿薩伊為研究對象，對阿薩伊油中植物甾醇及阿薩伊油的抗氧化活性進行了測定和評價，為建立全麵的阿薩伊質量評價方法奠定了基礎。阿薩伊及其油中其他類成分及其抗氧化活性有待進一步研究。
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[責任編輯 馬超一]