但上述通過在基因組水平上大規模設計引物篩選多態性的方法並不能準確地闡明林麝泌香過程的分子調控機製。因此學者們逐漸將注意力集中在與林麝泌香過程調控密切相關的激素基因上。鄒方東等[36]對林麝活化素基因beta-A亞基成熟肽序列的克隆和分析,成功克隆了與生殖及產香相關的核基因(活化素)。王勤等[37]克隆了林麝FSH(促卵泡素)和LH基因並對其進行了序列分析,這為開展林麝泌香過程中基因的表達提供了基礎與方法借鑒。此外,畢書增等[22]、尹淑媛等[38]的研究結果表明,雄性激素是誘導林麝產生泌香反應能力最強的激素。而雄性激素必須與雄性激素受體結合才能發揮生理生化功能,因此雄性激素受體很可能在林麝泌香過程中發揮這重要作用。為了嚐試找到雄性激素受體多態性位點變異與泌香量之間的關係,白康[39]開展了林麝雄性激素受體多態性與泌香量關係的研究,結果表明,林麝雄性激素受體基因外顯子1,4,8在陝西雄麝樣品中不存在多態性。這說明這3個外顯子在編碼蛋白質時具有保守性,對林麝的生殖和生理有重要的作用。雖然沒有檢測到林麝雄性激素受體基因外顯子1,4,8的多態性,但這為開展林麝泌香機製的研究提供了新的思路和方法借鑒。
4 問題及展望
4.1 存在的問題
4.1.1 炒種情況嚴重,大大阻礙了泌香機製的研究 目前,在整個林麝養殖產業中存在非常嚴重的炒種問題,每對林麝的價格在7萬~8萬,昂貴的種源成本大大降低了林麝產香的盈利能力,也大大提高了林麝研究的成本,這種現象不僅嚴重阻礙了林麝泌香機製的研究,而且不利於整個林麝養殖產業的健康發展。
4.1.2 林麝尚未完全馴化,不利於開展泌香機製相關研究 林麝的野性是開展林麝泌香機製研究最大的障礙。自從1958年開展人工養殖林麝以來,全國陸陸續續開展了林麝的馴化研究,並取得了一定的成果,其中包括陝西鎮坪、四川馬爾康等養殖基地[40-42]。但由於種種原因,林麝的馴化研究進展緩慢,造成了新生仔麝的野性依然較強。這常常給樣品采集帶來一定的困難,也給林麝帶來強烈的應激反應。強烈的應激反應不僅給實驗數據的可靠性與穩定性造成一定程度的影響,還對林麝自身的健康造成不利影響。
4.1.3 科研人員少,林麝泌香研究進展緩慢 雖然麝香的入藥曆史悠久,但我國從1958年才開始進行人工養麝的研究。相對於常見豬、雞、牛等,專門從事林麝研究的科研人員緊缺。這使得先進的分子生物學技術方在林麝上應用的時間相對靠後,這也大大地降低了林麝泌香機製相關研究的進展。
4.2 展望
4.2.1 新技術新方法的利用將大大加快林麝泌香機製研究進展 隨著分子生物學技術的迅猛發展,以前林麝泌香研究過程中的一些問題迎刃而解,如白康[38]建立了一種從林麝毛發重提取總DNA的高效方法。這種方法適用於從珍惜野生動物、應激強烈的動物及難以保定的大家畜基因組DNA的提取,而不用采血或者組織塊,這將大大降低對圈養林麝的應激。同時白康等[28]研究了各時期林麝糞便中睾酮和雌二醇激素含量變化,這大大降低了林麝由於采血帶來的應激,有助於瀕危動物林麝的保護和利用,具有重要的學術價值和經濟價值。此外,今年來發展起來的Real-time PCR,in situ hybridization,Western Blot等技術也為尋找林麝泌香相關基因及其表達量測定等提供技術支撐。
4.2.2 加強林麝馴化,為林麝泌香機製研究提供保障 野性是開展林麝泌香機製研究的最大障礙,因此,隻有大力加強林麝馴化研究,才能為開展林麝遺傳繁育研究、泌香機製研究和整個林麝產業的發展打下堅實基礎。不同於其他家養動物的漫長馴化過程[43-44],林麝從1958年才開始人工養殖馴化。雖然目前林麝馴化進展緩慢,但隨著近年來醫藥企業對林麝產業的重視和國家的相關政策支持,林麝的馴化工作將出現較大的新進展,為林麝泌香機製研究提供保障。
4.2.3 圈養林麝種群規模不斷擴大,有利於泌香機製的研究 隨著對林麝和麝香應用價值的逐漸深入,醫藥公司為了保證麝香品質的穩定,必須建立自己的原料供應基地。如四川逢春醫藥有限公司在陝西鎮坪和四川寶興建立了林麝養殖基地。福建漳州片仔癀麝業有限公司在四川米亞羅和陝西建擁有大型林麝養殖基地,存欄量達700餘頭[11]。與小型養殖戶不同,這些大型的林麝養殖企業和單位更注重林麝的泌香性能。因此隨著林麝種群數量的不斷擴大,林麝價格也將隨之下降,這有利於開展林麝泌香性能的選育提高,也對林麝泌香機製的研究有積極的促進作用。
綜上所述,目前林麝泌香機製研究尚處於嚐試階段,存在著各種各樣的問題。但隨著國家對林麝養殖產業的扶持和大企業對林麝養殖的積極參與,以及先進方法和先進技術的應用,林麝泌香機製的研究將會產生新的突破,有力地促進我國中醫藥事業的發展。
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