1.3 儀器 WMT-100 Morris水迷宮(成都泰盟科技有限公司);切片機(徠卡-2015,德國);TSJ-Q型全自動封閉式組織脫水機;BMJ-Ⅲ型包埋機;PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀;Motic BA400顯微攝像係統(麥克奧迪公司);Image-Pro 6.0圖像分析係統(美國Media Cybernetics,Inc.)。
2 方法與結果
2.1 造模、分組及給藥方法[8-10] 取健康SPF級SD大鼠,雌雄各半,適應性喂養3 d後,以Morris水迷宮實驗篩選學習記憶良好者用於造模。采用2-VO法永久性結紮雙側頸總動脈法[8-10]製備慢性腦缺血性學習記憶障礙模型,假手術組除不結紮外,其餘造模步驟與模型組相同。手術後動物連續3 d肌肉注射硫酸慶大黴素注射液每隻0.3 mL。術後恢複1個月後,取存活大鼠50隻,稱重後隨機分為5組,即模型對照組、甲磺酸雙氫麥角堿片組(0.7 mg·kg-1)、通絡醒腦泡騰片高、中、低劑量組(7.56,3.78,1.59 g·kg-1),每組10隻,另隨機取10隻假手術組大鼠為平行對照組。給藥體積為10 mL·kg-1,每日1次,連續給藥90 d,假手術組、模型組給予10 mL·kg-1生理鹽水。
2.2 大鼠學習記憶能力測試 給藥第86天開始進行Morris水迷宮訓練。平台放置在第一象限,測試方法參考文獻進行[11]。每天以4個象限放入後的逃避潛伏期的均值作為該天的逃避潛伏期成績進行統計分析,給藥第90天進行定向航向和空間探索測試,行為學測試均在晚上進行。模型組較假手術組的訓練第3,5天的逃避潛伏期顯著延長(P[13],而腦內儲存的糖原酵解供能維持大腦正常活動的時間少於5 min,一旦血流供應終止,5~7 min後ATP 貯庫耗竭,腦組織神經細胞不能進行主動過程(轉運、合成等)[14]。Aβ沉積形成老年斑也是AD的特征病變之一,由於Aβ前體蛋白的降解受ATP不足的影響,當氧化/能量代謝率下降超過50%時,即可觸發腦內Aβ的沉積[15],而Aβ與親環素D結合亦可導致線粒體滲透性通道的開放,從而加重了線粒體能量衰竭[16]。此外,當AD腦血流量減少,腦能量障礙時,無氧酵解增加,有氧氧化所需的PDH和α-KGDH活性下降,GSK-3活性增加,導致tau過度磷酸化,形成神經纖維纏結。研究表明,海馬是對腦缺血最敏感的區域之一,也是學習記憶的關鍵結構,海馬缺血的動物記憶力明顯下降[17]。Na+-K+-ATP酶活性是神經細胞質膜功能狀態的標記,其活性是反映機體能量代謝水平及腦缺血損傷程度的一項重要指標[18]。Na+-K+-ATP酶是依賴ATP功能的酶,ATP生成減少或耗竭時,該酶活性降低,細胞膜依賴其轉運的離子泵活性受到抑製,細胞內Na + 排出減少而水鈉瀦留,造成神經細胞水腫。
本次實驗研究表明,通絡醒腦泡騰片能顯著縮短Morris水迷宮大鼠定向航行測試的逃避潛伏期,且顯著增加空間搜索測試第一象限進入次數、經過逃逸平台次數和進入有效區域進入次數,與模型組比較有顯著的統計學意義(P[18];通絡醒腦泡騰片高、中劑量組海馬Na+-K+-ATP酶較模型組表達顯著增高,有顯著的統計學意義(P
[參考文獻]
[1] 黃芳華. 治療老年性癡呆中藥的藥效學研究評價探討[J]. 中國中醫基礎醫學雜誌, 2006, 12(9): 701.
[2] 褚文政,錢采韻. 阿爾茨海默病與胰島素信號紊亂及腦能量代謝障礙[J]. 中國臨床康複,2005,9(13):32.