1.6 統計學分析 應用SPSS 6.0軟件進行統計學分析，t檢驗和方差分析，P-1 Tau可顯著抑製PASMCs增殖（P-1；1.常氧組；2.常氧+Tau組；3.缺氧組；4.缺氧+Tau組。
與常氧組比較，常氧加Tau組PCNA的表達無顯著變化，缺氧組PCNA的表達顯著增加（P[6]。
而Tau能夠抑製主動脈血管平滑肌的增殖，改善主動脈血管的重構[4]。也有研究發現Tau可抑製血管平滑肌的成骨分化[5]，並且該抑製作用是通過ERK1/2通路實現的。本實驗室之前研究表明Tau可誘導PASMCs凋亡，並且在給藥24 h即可產生明顯作用[7]。因此，本實驗從Tau抑製PASMCs增殖的角度研究其改善肺血管重構的作用及可能信號轉導通路。
本實驗中，MTT結果顯示Tau給藥24 h後對常氧下PASMCs增殖沒有影響，缺氧條件下隨著給藥濃度的提升，在80 mmol·L-1時Tau可顯著抑製PASMCs增殖。在常氧及缺氧條件下Tau對PASMCs中TNF-α的表達無影響，表明Tau抑製PASMCs增殖的效應並非一種細胞毒性反應。
PCNA表達的多少是反映細胞增殖能力的指標。Cyclin A在DNA合成前的G1晚期出現，存在於細胞核內，它的正常表達代表正常的細胞生殖活性。在PASMCs中缺氧上調PCNA和Cyclin A的表達[8]。免疫熒光結果顯示缺氧確實使PCNA表達增多，並且Tau使PCNA表達減少。免疫蛋白印跡法檢測Tau（80 mmol·L-1）作用24 h後PCNA，Cyclin A的表達，結果顯示Tau對正常細胞PCNA，Cyclin A的表達沒有影響，缺氧可顯著上調PCNA，Cyclin A的表達，而Tau可抑製缺氧引起的PCNA，Cyclin A的高表達，表明Tau可抑製缺氧導致的PASMCs增殖。
MAPK 家族中ERK1/ERK2可以通過上調PCNA、細胞周期素和細胞周期素依賴的蛋白激酶（CDK）的表達，與細胞增殖最為密切，包括生長因子、血管緊張素Ⅱ和內皮素等在內的許多刺激因子均通過活化ERK1/2促進VSMC增殖[9-10]。因此，調控ERK1/2表達將對PASMCs增殖產生重要影響。
有報道稱Tau能顯著抑製PDGF-BB誘導的血管平滑肌細胞增殖、DNA合成及ERK1/2的磷酸化[11]，並且Tau可以通過ERK1/2抑製心肌細胞增殖，使ERK1/2磷酸化程度降低[12]。
缺氧可使PASMCs的ERK1/2激活促進肺動脈平滑肌細胞增殖，於是考慮Tau可否通過調控ERK1/2通路來抑製PASMCs的增殖。免疫蛋白印跡法檢測結果表明缺氧使p-ERK1/2表達增加，這一結果與研究一致[13]。Tau抑製缺氧誘導的ERK1/2磷酸化，表明Tau與PD98059對ERK1/2有類似的阻斷作用。為進一步證明Tau是否是通過ERK1/2通路來抑製PASMCs增殖的，用ERK1/2阻斷劑PD98059阻斷ERK1/2通路。Lu等報道50 μmol·L -1 PD98059可阻斷ERK1/2通路[13]。本實驗觀察了缺氧刺激PASMCs後，Tau與PD98059共同作用的結果。Tau可抑製缺氧誘導的ERK1/2磷酸化，說明Tau可能是通過調控ERK1/2來抑製缺氧誘導的PASMCs增殖的。Hyp+Tau+PD98059組PCNA，Cyclin A表達顯著低於單用Tau或者單用PD98059組。為進一步說明Tau通過ERK1/2而發揮抑製作用，本實驗檢測了Tau和PD98059單獨及協同對p-ERK1/2表達的影響，結果顯示Tau與PD98059可協同抑製ERK1/2磷酸化。這表明Tau可能通過調控ERK1/2來抑製PASMCs增殖。
[參考文獻]
[1] Ghofrani H A， Voswinckel R， Reichenberger F， et al. Hypoxia and non-hypoxia-related pulmonary hypertention established and new therapies[J]. Cardiovasc Res，2006，72：30.
[2] Oudit G Y， Trivier M G， Khaper N， et al. Taurine supplementation reduces oxidative stress and improves cardiovascular function in an iron-overload murine model[J]. Circulation，2004，109：1877.