化合物14 黃色粉末；HR-ESI-TOF-MS m/z 481.168 0[M+Na]+（C21H20NaO11，計算值471.089 8）；1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.00（1H，d，J=8.3 Hz，H-6），6.79（1H，d，J=1.6 Hz，H-3），6.69（1H，dd，J=8.3，1.6 Hz，H-5），5.94（1H，ddt，J=16.3，9.5，6.5 Hz，H-8），5.09（1H，d，J=1.6 Hz，H-9a），5.04（1H，d，J=1.6 Hz，H-9b），4.81（1H，d，J=3.0 Hz，H-1″），4.79（1H，d，J=7.4 Hz，H-1′），3.87（1H，d，J=9.4 Hz，H-4″a），3.85（1H，d，J=11.2，H-6′a），3.74（3H，s，2-OCH3），3.73（1H，m，H-2″），3.58（1H，d，J=9.4 Hz，H-4″b），3.45（1H，m，H-5′），3.41（1H，d，J=11.2 Hz，H-6′b），3.34（1H，m，H-5″），3.31（2H，m，H-7），3.25（1H，m，H-3′），3.24（1H，m，H-2′），3.08（1H，s，H-4′）； 13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：145.0（C-1），149.0（C-2），115.7（C-3），133.5（C-4），120.5（C-5），113.0（C-6），39.2（C-7），137.9（C-8），115.5（C-9），100.5（C-1′），73.2（C-2′），76.8（C-3′），70.0（C-4′），75.5（C-5′），67.7（C-6′），109.3（C-1″），75.9（C-2″），78.7（C-3″），73.3（C-4″），63.1（C-5″），55.7（2-OCH3）。以上數據與文獻[16]報道丁香酚-O-β-D-呋喃芹糖（1″-6′）-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的數據基本一致。
化合物15 白色粉末；[α]20D -38.5（c 0.1，MeOH）； HR-ESI-TOF-MS m/z 603.204 8[M+Na]+（C28H36NaO13，計算值603.204 8）； 1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：6.72（ 2H，s，H-2，6 ），6.66（2H，s，H-2′，6′ ），4.85（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.77（1H，d，J=4.0 Hz，H-7），4.71（1H，d，J=4.0 Hz，H-7′），4.27（2H，m，H-9a，9′a），4.10（1H，d，J=7.1 Hz，H-1″），3.91（2H，d，J=9.4 Hz，H-9b，9′b），3.86（6H，s，3，3′-OCH3），3.85（6H，s，5，5′-OCH3），3.13（2H，m，H-8，8′）； 13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：136.9（C-1），106.8（C-2，6），155.9（C-3，5），140.9（C-4），89.1（C-7），57.2（C-8），74.4（C-9，9′），135.0（C-1′），106.3（C-2′，6′），150.9（C-3′，5′），137.2（C-4′），88.7（C-7′），57.0（C-8′），106.0（C-1″），77.2（C-2″），79.3（C-3″），72.8（C-4″），79.9（C-5″），64.1（C-6″），58.6（-OCH3），58.3（-OCH3）。以上數據與文獻[17]報道（+）-丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的數據基本一致。
4 藥理活性篩選
4.1 化合物對HSC-T6增殖的影響 利用MTT法測試分離得到的10個黃酮類化合物抑製HSC-T6細胞增殖的能力，比較各黃酮化合物的IC50，其中表沒食子兒茶素兒茶酸脂（EGCG）為陽性藥。結果顯示化合物1～4，6，7有一定的抑製HSC-T6細胞增殖的能力（表1）。其中槲皮素（1）和7，8，3′，4′-四羥基二氫黃酮（6）的抑製活性與陽性藥EGCG（43.52 μmol·L-1）相當。
4.2 黃酮類化合物對腹腔巨噬細胞分泌細胞因子含量的影響 對黃酮類化合物進行了抗炎免疫活性篩選。采用Elisa法測定LPS刺激的RAW264.7細胞培養上清中TNF-α和IL-1的含量。結果顯示，10個化合物體外給藥均不同程度的降低細胞TNF-α和IL-1的產生，並隨濃度增高抑製率增強。其中化合物1，2，6，7抑製IL-1產生的效果最為明顯（表2）。
5 討論
在前期研究中發現，鬼針草總黃酮提取物對各種原因誘導的肝纖維化均有治療作用。但目前鬼針草總黃酮中的化學組成仍不清楚，起到治療肝纖維化作用的成分尚不明確。本文從傳統的天然產物分離方法入手，分離得到15個化合物，其中有10個為黃酮類化合物，含量較高。在這15個化合物中8，13～15為首次在該屬植物中分離得到的化合物。
肝星狀細胞（HSC）的激活是肝纖維化形成的中心環節，肝髒損傷時，HSC 受到各種致病因子的刺激，從靜息狀態轉化為肌成纖維細胞並產生大量的細胞外基質（ECM）在肝髒沉積，最終導致肝纖維化的發生[18]。巨噬細胞在肝纖維化的過程中也很重要，其合成和釋放的細胞因子如TNF-α和白介素1，6，8等促肝纖維化細胞因子，參與調節肝星狀細胞的激活、增殖和膠原合成。本文在分離得到的化合物基礎上，著重研究含量較高的黃酮類化合物在體外對HSC-T6細胞增殖以及對巨噬細胞RAW264.7釋放的炎症因子的作用。
結果顯示，3′，4′鄰二羥基取代的黃酮和二氫黃酮類化合物1，2，6，7有較強的抑製HSC-T6增殖的活性，因此推測3′，4′鄰二羥基為抑製肝星狀細胞增殖的重要基團；化合物2和7的活性又相對弱於1和6，因此推測，黃酮類化合物3，7位的羥基可能為抑製肝星狀細胞增殖的重要基團。同樣，化合物1和6有較強的抑製RAW264.7細胞分泌腫瘤壞死因子TNF-α和IL-1的能力，推測其活性可能也與3′，4′鄰二羥基有關。
本實驗從鬼針草總黃酮第Ⅲ部分中分離得到15個化合物，經過體外篩選得到2個活性較強的抗肝纖維化化合物。然而鬼針草總黃酮其餘部分組分仍然未知，因此，還需要進一步的分離以及篩選抗肝纖維化的化合物，得到更多活性更強的化合物。
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