正文 第三章 分光光度技術(2 / 2)

(4)將離心管放好後,蓋好離心機蓋,檢查所需電源電壓的大小,再按要求將電源接通。轉動速度調節旋鈕,逐步增加到所需要的離心速度。

(5)離心機轉動時,如果機身不穩或聲音不均勻時,應立即停止離心,重新檢查重量是否對稱和離心機是否放平穩。離心時,玻璃管、套管打碎應立即清除,重新配平後再離心。

(6)離心到規定時間後,將轉速旋鈕逐步回轉到零,再關閉電源。不可以用手強製使其停止轉動,因這樣既損傷離心機,沉澱又可能被攪動浮起。待離心機停穩後,取出離心管及管套,最後將電源插頭拔下。

2.操作注意事項

(1)裝載溶液時,要根據各種離心機的具體操作說明進行,根據待離心液體的性質及體積選用適合的離心管。有的離心管無蓋,液體不得裝的過多,以防離心時甩出,造成轉頭不平衡、生鏽或被腐蝕。而製備型離心機的離心管,則常常要求必須將液體裝滿,以免離心時塑料離心管發生變形。每次使用後,必須仔細檢查轉頭,及時清洗、擦幹,轉頭是離心機中需重點保護的部件,搬動時要小心,不要碰撞,避免造成傷痕,轉頭長時間不用時,要塗上一層蠟保護,嚴禁使用變形或老化的離心管。

(2)使用各種離心機時,必須事先在天平上精密地平衡離心管和其內容物,平衡時重量之差不得超過離心機說明書上所規定的範圍。轉頭中絕對不能裝載單數離心管,當轉頭隻是部分裝載時,管子必須互相對稱放置,以便使負載均勻地分布在轉頭的周圍。

(3)在配平時,勿使離心管套外部沾水,否則會影響結果。

(4)離心過程中不得隨意離開,應隨時觀察離心機上的儀表是否正常工作,如有異常聲音應立即停機檢查,及時排除故障。

(5)每個轉頭各有其最高允許轉速和使用類別及期限,使用轉頭時要查閱說明書,不得過速使用。每個轉頭都要有一份使用檔案,記錄使用時間,若超過了該轉頭的最高使用時限,則須按規定降速使用。

第三節常用離心方法

一、差速沉降離心法

差速沉降離心法是采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替離心,用大小不同的離心力使具有不同沉降係數的顆粒分批沉澱的方法。此法一般用於分離沉降係數相差一個到幾個數量級的顆粒。差速沉降離心首先要選擇好每種顆粒沉降所需要的離心力和離心時間。當以一定的力在一定的時間內進行離心時,在離心管底部得到最大和最重顆粒的沉澱,分出的上清液在加大轉速下再進行離心,又得到第二部分較重顆粒的沉澱及含較小和較輕顆粒的上清液,如此多次離心處理,即能把液體中的不同顆粒較好地分離開。此法所得的沉澱是不均一的,仍摻雜有其他成分,需經過2~3次的再離心,才能得到較純的顆粒。

此法主要用於從組織勻漿液中分離細胞器和病毒,其優點:操作簡易,離心後用傾倒法即可將上清液與沉澱分開。但需多次離心,分離效果差,不能一次得到純顆粒,沉澱於管底的顆粒受擠壓容易變性失活。

二、密度梯度區帶離心法

密度梯度區帶離心法又稱區帶離心法,是將樣品粒子在一個密度梯度介質中離心,這個介質由一合適的小分子和樣品粒子可在其中懸浮的溶劑組成,在一定的離心力下,離心一定時間後不同大小的顆粒將沉降在不同的層次,產生所謂區帶的方法。這種方法適用於分離密度相似而大小有別的樣品。此法的優點:分離效果好,可一次獲得樣品中分離的幾個或全部組分較純的顆粒;適應範圍廣,既能分離具有沉降係數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;顆粒不會擠壓變形,保持顆粒的活性,又可防止成形的區帶由於對流而引起混合;具有很好的分辨能力。缺點:離心時間長;需要製備密度梯度介質溶液,操作嚴格,不易掌握。