【目的要求】
1.驗證蛋白質的主要化學性質
2.學會蛋白質溶液分段鹽析的操作。
【實驗用品】
試管、酒精燈、燒杯、試管架、試管夾、漏鬥、漏鬥架、濾紙、玻璃棒。
1mol·L-1NaOH、2.5mol·L-1NaOH、5mol·L-1NaOH、2.5mol·L-1鹽酸、0.03mol·L-1CuSO4、0.02mol·L-1Pb(Ac)2、0.3mol·L-1AgNO3、0.06mol·L-1CuSO4、2mol·L-1醋酸、米倫試劑、茚三酮試劑、醋酸、飽和硫酸銨溶液、硫酸、蛋白質氯化鈉溶液、飽和鞣酸溶液、飽和苦味酸溶液、雞蛋白溶液、濃硝酸、雞蛋白氯化鈉溶液、φB=0.95的乙醇、硫酸銨(固體)。
【實驗原理】
蛋白質分子中的氨基酸主要以肽鍵相連接,因此蛋白質具有縮二脲反應。蛋白質還可與茚三酮等試劑反應,生成有色物質。可以用上述顏色反應檢驗蛋白質。
蛋白質能被有機溶劑(如酒精、丙酮)、重金屬鹽和某些酸類及生物堿沉澱劑所沉澱。
向蛋白質溶液中加入電解質(無機鹽類)到一定濃度時,蛋白質便沉澱析出,這個作用稱為鹽析。由於不同蛋白質鹽析時所需的鹽析濃度不同,因此可以用不同濃度的鹽溶液,使不同的蛋白質分段析出,予以分離。這種方法稱為分段鹽析。
蛋白質是由氨基酸組成的。不論肽鍵多長,在其鏈端和側鏈上總有遊離的氨基和羧基存在。蛋白質和氨基酸一樣,也是兩性物質,因此既能和酸作用,也能和堿反應。
【實驗內容和操作】
1.顏色反應
(1)縮二脲反應:取1支試管,加入雞蛋白溶液1ml、2.5mol·L-1NaOH1ml、0.06mol·L-1CuSO43滴。觀察並解釋所發生的變化。
(2)茚三酮反應:取1支試管,加入雞蛋白溶液1ml,然後加入茚三酮試劑2~3滴,在沸水中加熱10~15分鍾。觀察並解釋發生的變化。
(3)黃蛋白反應:取1支試管,加入雞蛋白溶液1ml,然後加入6~8滴濃硝酸,放在沸水浴中加熱。觀察現象,放冷。然後再滴加5mol·L-1NaOH到堿性,觀察並解釋發生的變化。
(4)米倫反應:取試管1支,加入雞蛋白溶液1ml,然後加入米倫試劑3滴,置水浴中加熱,觀察並解釋發生的變化。
2.蛋白質的鹽析取試管1支,加入雞蛋白氯化鈉溶液及飽和硫酸銨溶液各2ml,振蕩後靜置5分鍾。觀察是否析出球蛋白沉澱(溶液渾濁或結絮),並說明原因。
將試管內渾濁液用濾紙過濾。向濾液中加入硫酸銨結晶性粉末,直至不再溶解為止。觀察是否析出清蛋白沉澱,說明原因。隨後傾出此渾濁液1ml於另一試管中,加2~3ml水振蕩,觀察析出的清蛋白沉澱是否重新溶解,解釋原因。
3.蛋白質的變性
(1)乙醇對蛋白質的作用:取試管1支,加入雞蛋白溶液1ml,沿試管壁加?=0.95的乙醇20滴,觀察兩液界麵處有何現象產生,並解釋原因。