正文 任務二 馬的人工授精技術(1 / 2)

【任務實施動物及材料】種公馬、發情母馬、數碼顯微鏡、光電顯微鏡、恒溫水浴鍋、恒溫幹燥箱、電熱恒溫板、液氮罐、氟板、假陰道、馬鮮精、馬顆粒凍精、雞蛋、染料、甘油、葡萄糖、蔗糖、明膠、馬奶、奶粉、青黴素、雙氫鏈黴素、蒸餾水、輸精管、一次性塑料手套、大方盤、注射器、計算板、紗布等。

【任務實施步驟】

一、采精

(一)準備工作

公馬的準備:包括體表的清潔消毒和誘情(性準備)兩個方麵。采精前應擦拭公馬下腹部,用0.1%高錳酸鉀溶液洗淨其包皮處並擦幹,用生理鹽水清洗包皮腔內積尿和其他殘留物並擦幹。在采精前,需以不同誘情方法使公馬有充分的性興奮和性欲,一般采取讓公馬在台馬附近停留片刻,進行2~3次假爬跨的方法。

人員的準備:采精員應具有熟練的技術,采精時注意人畜安全。應有固定的工作服與鞋帽,並保持整潔。采精前應剪短指甲,並戴上一次性手套。將台馬固定好,根據種公馬的體型確定高度,正確組裝假陰道,調整假陰道內溫度。

(二)采精方法

當公馬陰莖勃起並爬跨時,采精員左手握住龜頭頸部,將陰莖導入假陰道內。此時采精員應以右肩部抵住假陰道的集精杯端,並用雙手固定假陰道於台馬的臀部。當其在假陰道內來回抽動時,應盡量使假陰道保持平穩。一般經l~3min後陰莖基部和尾根呈現有節律性搏動即射精,這時將假陰道轉為水平。射精完畢後,在公馬從真(假)台馬跳下之前,應將集精杯逐漸向下傾斜,為了減少假陰道的壓力,將氣門打開緩慢放氣,以利於陰莖從假陰道內抽出。隨後輕輕取下,蓋好紗布。在室內取下集精杯,並及時送交精液處理室。

(三)注意事項

對於初次采精的公馬,采精之前應先調教;公馬采精前應進行性準備或性誘導;使用真台馬應戴籠頭防止咬傷;公馬射精前,後肢會經常移動,此時采精員應注意勿被踩傷。

二、精液處理

(一)外觀性狀檢查

1.采精量

測量采精量之前,首先用紗布或特定的過濾紙對精液進行過濾,除去精液中含有的膠狀分泌物,然後倒入有刻度的試管或集精杯中進行測量。馬的采精量平均為70mL(30~100mL)。

2.色澤和氣味

馬精液稀薄,呈灰白色,無味或略帶腥味。

(二)精子活力、密度和畸形率檢查

具體檢查方法詳見項目一牛繁殖技術。

(三)精液的稀釋與保存

1.稀釋液的配製

以乳糖卵甘油液為例,馬、驢精液常用顆粒冷凍保存。

(1)基礎液的配製。用天平稱取11g乳糖放入燒杯中,然後用量筒量取蒸餾水100mL,將蒸餾水倒入燒杯中,攪拌至充分溶解。用三聯漏鬥(內放定性濾紙)過濾,用三角燒瓶接取濾液。最後將基礎液放入100℃的水浴鍋中水浴消毒10~20min。

(2)取冷卻到40℃的基礎液95.4(容量%),分別加入卵黃0.8(容量%)、甘油3.8(容量%)、青黴素(1000IU/mL)、雙氫鏈黴素(1000μg/mL),充分溶解。

2.稀釋精液

常采用一次稀釋法。將精液和稀釋液分別裝入三角燒瓶中,置於30℃的水浴鍋中,用玻璃棒引流,把稀釋液沿著容器壁慢慢加入精液中,邊加入邊攪拌。稀釋結束後,用顯微鏡檢查精子活力。確認合格後方可製作顆粒凍精。

3.降溫平衡

降溫是從30℃經1~2h緩慢降至5℃;平衡的目的是使甘油充分滲入精子內部,達到抗凍、保護的作用。

4.顆粒凍精的冷凍方法

在裝有液氮的廣口保溫容器上置一銅紗網,距離液氮麵1~2cm預冷數分鍾後,使銅紗網網麵溫度保持在-120~-80℃。或用聚四氟乙烯凹板(氟板)代替銅紗網,先將其浸入液氮中幾分鍾,再置於距液氮麵2cm處。然後將平衡後的精液定量而均勻地進行滴凍,每粒0.1mL左右。當滴凍後的精液停留2~4min後顆粒顏色變白發亮時,用鏟子鏟下精液顆粒,將其置於液氮中,取出1~2粒解凍,檢查精子活力。活力達到0.3以上可收集到紗布袋中,並做好標記,儲存於液氮罐中保存。滴凍時注意要滴管事先預冷,與平衡溫度一致;操作時要準確迅速,防止精液溫度回升,顆粒大小要均勻;每滴完一頭公馬的精液後,必須更換滴管、氟板等用具。