第四節 壓片製做法
把需要觀察的材料經過處理後放在載玻片上，將其分散，蓋上盞玻片，晃拇指垂直下壓，使材料均勻分布成一簿層，當時觀接或經過係列處項，製成永久裝片的製片方法稱壓片法。常詔於觀察細珣形態；有絲分裂過程，染色位數目，組型和結構等。
一、洋蔥根尖浮眾複染色壓片
（一）根尖的培養和取材
內倒適量自來水，篇洋蔥根部浸入，在18~2513室顯。根尖沄到1~2厘米長時取材。
放人對二氯苯的逾和水溶液內處理3~5小時後麵定。放人蒸餾水內，在0~3的低溫下處理24小時後固定。
（二）處理
處理都能顯地抑製細胞內繳錘體的活動，使染色體縮短，有刺於對染色體的計數研究。將經過處理的洋蔥根尖放入卡諾氏液內固定，一般為2~12小時。
（三）對洋蔥根尖進行整體浮爾根染色，步驟如下：
1.將固定後的根尖經酒精複水，每線10分鍾。然後入蒸餾水浸洗。
2.水解將材料放入1況鹽酸水溶液內，置於60度恒溫溶解1~15分鍾。
3.席夫試劑染色材料水解後，相蒸糖水浸洗2~3次，入席夫試徹（配方見草履蟲大、小核裝片）染色1~5小時。衝洗材料染色後入漂洗液；偏亞硫酸氫鈉水溶液5毫升，蒸餾水100毫升）浸洗三次，每次5~10分鍾，洗去浮色。用流水衝洗10~15分鍾，再用蒸餾永浸洗次。
（四）壓片與冷凍處理
取衝洗後的根尖，置於載玻片中央的夂滴蒸餾水中，用刀片將其染成紫紅色的尖端切下。蓋上蓋玻片，在蓋玻片上再放一小塊吸水紙。拇指垂直按在吸永紙上向下壓。然後用解翻針純端輕輕敲擊蓋玻片，使材料分散均勻。用顯微鏡檢查壓片，選擇合格者用蠟筆於蓋玻片四周的載玻片上劃出標，放入冰箱內或半導體式冷凍切片機製冷器上進行冷凍，冷凍後，用解剖刀將蓋玻片輕輕地取下來，放在載玻片上無材料的地方。
（五）烘幹與封片
將載玻片排列於木托盤內，放人38~40度的恒溫箱內烘幹。然後將樹胺溶液滴壓在材料上，把蓋玻片按原位蓋好，放入烘箱內繼續烘幹。
結果：染色體被染成鮮豔的紫紅色。
二、小麥花粉母細胞減數分裂壓片
（一）取材與固定
在小麥的旗葉與下一葉片的葉耳間距3~4厘米時取材，小麥為複穂狀花序，花序軸中上部的小穗優先發育，而每一小穗上，花的發育順序則是從基部開始，漸向頂端。取黃綠色的花藥為好。取材後入卡諾氏液固定1~24小時，然後移入酒精，在低溫下保存。也可以用醋酸洋紅染色，當時做壓片。
（二）染色與壓片
將材料從固定液（或酒精）中取出，放在吸水紙上吸幹周圍的液體，移到塗有蛋白甘油的載玻片上。用鑷子輕輕地夾住花藥的一端，將其縱向剖開。將花粉刮到蛋白甘油層上並使其分散。去掉花藥壁，滴醋酸洋紅於花粉上（要使花粉粒浸在染色液內），染色3~5分鍾，如染色液蒸發減少，可再滴少許。染畢蓋上蓋玻片，用酒精燈微微加熱，以加深染色並使細胞軟化，細胞質破壞，便於染色體分散。但不能加熱至沸。然後在蓋玻片上放一小塊濾紙，用拇指垂直下壓，切勿使蓋玻片移位。壓完再用解剖針柄輕輕敲擊蓋玻片，使材料均勻分散。鏡檢時選擇效果好的壓片，用碳素墨汁做上標記。
（三）脫水、透明與封片
在培養皿內放一短粗的玻璃棒，將選好的壓片蓋玻片朝下，呈傾斜狀放於培養皿內，然後倒入場醋酸與1/2酒精混合液。待蓋玻片脫落後，依次換酒精、酒精與1/2叔丁醇混合液、叔丁醇，進行脫水和透明，每級2~5分鍾。透明後，滴適量樹膠叔丁醇溶液於材料上，取蓋玻片在原處蓋好。自然風幹或烤幹。結果：染色體被染成紅色。
三、果蠅唾液腺巨大染色體壓片
（一）果蠅的培養和選擇
果蠅幼蟲唾液腺的染色體較大，在教學上常用來觀察染色體帶紋的形態和排列，識別不同的染色體。果蠅繁殖快，取材方便，常用玉米麵一糖一瓊脂培養基培養。
先用一半水將蔗糖、瓊脂加熱溶解，再用另一半水將玉米麵加熱溶解。然後將兩者均勻混合後，加入丙酸攪勾，並趁熱倒入已滅菌的廣口瓶內，倒入數量約占廣口瓶容積的1/3，培養基冷卻凝固後，再滴入數滴酵母菌水溶液。培養基灌瓶和滴酵母菌水溶液，應該在無菌操作台上進行。然後放幾對果蠅於瓶中，瓶口塞好棉塞，置於20~25攝氏度的恒溫箱內培養。幾天後將會繁殖出大量的果蠅幼蟲。從三齡幼蟲中選擇大而爬不動者拉取唾液腺。
（二）拉唾液腺
將選好的果蠅幼蟲置於載玻片上，滴一滴0.75的生理鹽水，放在雙筒解剖鏡下。左手拿解剖針壓住幼蟲的尾部，右手拿解剖針插入幼蟲頭部末端，向外將頭部的唾液腺拉出。唾液腺位於消化道前端的小管上，半透明，形狀象小茄子。唾液腺拉出後，哮掉其上白色泡沫狀的脂肪。
（三）解離與衝洗
用吸水紙將唾液腺上的生理鹽水吸淨，滴一滴鹽酸水溶液，解離1分鍾。然後用蒸餾水衝洗2~3次，把鹽酸洗淨，否則會影響染色。
（四）染色；唾液腺辨染色方法很多，常用改良：石碟紅溶液進行滴染，要滴足染液，覆蓋材料，染色15~20分鍾。
染色液為改良石碳酸品紅溶液，三年之內有效。
（五）壓片
染色後在載玻片上擺正唾液腺的位置，蓽好蓋玻片，並在蓋玻片上放一小塊吸水紙。用拇指垂直下壓蓋玻片，切勿使蓋玻片移位。壓後再用解剖針柄輕輕敲擊騫玻片，使染色體分散均勻。在顯微鏡下檢查，合格者可做成永久裝片。