第一節血清轉氨酶檢查
一、概述
肝髒有近千種酶,轉氨酶有數十種,其中臨床最常檢查有兩種:1、穀氨酸丙酮酸轉氨酶,簡稱穀丙轉氨酶(GPT),又稱丙氨酸轉氨酶(ALT);2、穀氨酸草酰乙酸轉氨酶,簡稱穀草轉氨酶(GOT),又稱門冬氨酸氨基轉氨酶(AST)。
許多髒器和組織均含有這兩種轉氨酶,但兩者分布的次序為:ALT:肝>腎>心>肌肉;AST:心>肝>肌肉>腎。
1.測定方法關於ALT和AST活性的測定:目前國內主要采用IFCC,歐洲常用DGKC法和ECCLSI法。三種酶反應均是加入底物到反應混合物中啟動反應,最適溫度37℃。測定原理如下:
檢測原理:測定AST所用的酶反應如下:
L天冬氨酸+α酮戊二酸AST草酸乙酸鹽+L穀氨酸,草酸乙酸鹽+NADH+H+MDHL蘋果酸+NAD+,測定ALT所用的酶反應如下:
L丙氨酸+α酮戊二酸ALT丙酮酸+L穀氨酸,丙酮酸+NADH+H+LDHL乳酸+NAD+,通過測定NADH吸光度值的變化(下降值)來描述ALT和AST的活性。
ALT活性:室溫下(20℃)和4~8℃血清可穩定7天。
AST活性:室溫下(20℃)持續輕度降低,4~8℃血清可穩定7天。
2.參考範圍,ALT正常值:比色法(賴氏法):5~25Karmen,速率法:0~40U/L(37℃),AST正常值:比色法(賴氏法):8~28Karmen,速率法:0~40U/L(37℃),3.檢查指征以下疾病應檢測血清轉氨酶:肝膽疾病(查ALT、AST)、心肌梗死(查AST)、骨骼肌損傷(查AST)的診斷與鑒別診斷、臨床用藥觀察、病程監測和治療反應。
第二節乳酸脫氫酶檢查
一、概述
乳酸脫氫酶(LDH)屬氫轉移酶,是參與糖無氧酵解和糖異生的重要酶,能夠催化丙酮酸與L乳酸之間的還原與氧化反應。
有胸腔積液和腹腔積液的患者,抽取積液做LDH及其同工酶檢查,對疾病的診斷和鑒別診斷有一定的參考價值。
1.測定方法速率法:測定LDH所用的酶反應如下:
L乳酸+NADLDH丙酮酸+NADH+H+,通過測定NADH吸光值在340nm波長的上升速率,即可得出LDH的活性。
室溫下(20℃)血清可穩定7天,由於LDH4和LDH5對冷敏感,故常規分析血清應貯存於室溫下。
2.參考範圍速率法測定血清LDH總活力:
乳酸→丙酮酸反應:49~110U/L,丙酮酸→乳酸反應:200~380U/L,3.檢查指征以下情況應檢測血清乳酸脫氫酶:心肌梗死的監測、懷疑肺栓塞、區分黃疸類型、懷疑溶血性貧血、惡性疾病的診斷和隨訪。
第三節堿性磷酸酶檢查
一、概述
堿性磷酸酶是一組在pH9~10.5的堿性環境中催化有機磷脂水解的酶,並且有轉磷酸基作用。ALP對肝內占位性及浸潤性病變的診斷也有參考價值,但反映肝細胞損害並不敏感。在骨組織中ALP由造骨細胞產生,骨疾患(有新骨生成)時血清ALP增高。血清ALP亦被認為是成骨細胞活性的一個標誌物,但由於ALP是由多種同工酶組成的一組專一性較低的酶,所以缺乏特異性,而血清中骨型ALP(BALP)來源於成骨細胞,是反映成骨細胞活性和骨形成的敏感指標之一,用於評價骨形成和骨轉化特異性強。總ALP增加也可以是生理性的,可由肝髒和(或)骨骼疾病引起。
1.測定方法國內應用較多的是IFCC推薦的方法,即以對硝基苯磷酸為基質的速率法。
測定原理:測定ALP所用的酶反應如下:
對硝基苯磷酸鹽+H2OALP對硝基苯酚+磷酸鹽,黃色的對硝基苯酚在405nm波長吸光度增加的速率即可測定ALP的活性。
ALP在室溫(20℃)下3天,活性下降3%。4~8℃條件下,穩定1周。
2.參考範圍(2)血清(漿)中的骨型堿性磷酸酶:IFCC方法,37℃,成年男性,60U/L;成年女性,50U/L。
3.檢查指征
(1)肝膽疾病的診斷和監測:梗阻性黃疸、膽汁性肝硬化、肝細胞性疾病、原發性肝腫瘤、肝轉移瘤。
(2)骨病的診斷和監測:1、原發性骨病。變形性骨炎、肢端肥大症、甲狀腺功能亢進症、腎功能不全、維生素D中毒症、多骨性纖維性發育不良、原發性骨髓瘤。2、繼發性骨病。骨轉移瘤、多發性骨髓瘤、甲狀旁腺功能亢進、肢端肥大症、甲狀腺功能亢進症、腎功能不全、骨折愈合、異位性骨化、結核病、骨結核。