四、采精操作技術
1.采精前的準備
(1)采精器具的消毒。膠質器具經洗滌劑洗淨晾幹後,隔水煮沸30min以上。玻璃搪瓷、金屬等器具經洗滌劑洗淨晾幹後,於160~200℃幹燥箱消毒30~60min。
(2)集精杯在采精前用5%葡萄糖溶液或稀釋液衝洗1次,然後在集精杯上覆蓋4層紗布。
(3)采精操作者、種公豬、采精台以及一切與精液直接接觸的器材都應嚴格進行常規消毒處理。器材溫度均應保持在30℃左右。
2.精液稀釋液的配置稀釋液配製操作規程:
①配製稀釋液的藥品要求選用分析純試劑,對含有結晶水的試劑要按摩爾濃度進行換算(如含水葡萄糖和無水葡萄糖);
②按稀釋液配方,用稱量紙、電子天秤準確稱量藥品;
③按1000mL、2000mL劑量稱量稀釋粉,置於密封袋中;
④使用前將稱量好的稀釋粉溶於定量的雙蒸水中,可用磁力攪拌器助其溶解;
⑤用濾紙過濾,以盡可能除去雜質;
⑥用1mol/L稀鹽酸或1mol/L氫氧化鈉調整稀釋液的pH值為7.2左右(6.8~7.4),滲透壓為330mosm/kg;稀釋液配好,應及時貼上標簽,標明品名、配製日期和時間、經手人等;
⑦要認真檢查已配製好的稀釋液成品,發現問題及時糾正;
⑧液態狀稀釋液冰箱4℃保存,不超過24h,超過有效儲存期的變質稀釋液應廢棄。
3.采精
(1)采精應在室內進行。采精室應清潔無塵,安靜無幹擾,地麵平坦不滑。
(2)采精員穿戴潔淨工作衣帽,長膠鞋,膠手套。膠手套應先用75%乙醇消毒、晾幹,30min後使用。
(3)采精前,將公豬趕進采精預備室後,用40℃溫水洗淨包皮及其周圍,再用0.1%高錳酸鉀溶液擦洗、抹幹。
(4)采精方法主要采用手采法。手采法步驟:
①采精員一手戴雙層手套,另一手持37℃保溫杯(內裝一次性食品袋)用於收集精液;
②飼養員將待采精的公豬趕至采精欄,用0.1%高錳酸鉀溶液清洗其腹部和包皮,再用溫水(夏天用自來水)清洗幹淨,避免藥物殘留對精子的傷害;
③采精員擠出公豬包皮積尿,按摩公豬包皮部,刺激其爬跨假母豬;
④公豬爬跨假母豬並逐步伸出陰莖,脫去外層手套,將公豬陰莖龜頭導入空拳;
⑤用手(大拇指與龜頭方向相反)緊握伸出的公豬陰莖螺旋狀龜頭,順其向前衝力將陰莖的“S”形彎曲拉直,握緊陰莖龜頭防止其旋轉,公豬即可射精;
⑥用四層紗布過濾收集濃份精液於保溫杯內的一次性食品袋內,最初射出的少量精液含精子很少,可以不必接取,有些公豬分2~3個階段將濃份精液射出,直到公豬射精完畢,射精過程曆時5~7min。
(5)采精過程注意事項:①采精員應注意安全,一旦公豬出現攻擊行為,采精員應立刻逃至安全角;②下班之前徹底清洗采精欄;③采精期間不準毆打公豬,防止出現性抑製;④采精頻率:成年公豬每周2次,1歲左右青年公豬每周1次。最好固定每頭公豬的采精頻率。
五、精液品質檢查
精液品質檢查可以了解種公豬的配種能力、確定精液可稀釋的倍數,檢查精液的處理方法是否正確,檢查精液產品的質量。檢查可分為直觀檢查和微觀檢查。直觀檢查包括射精量、色澤、氣味、pH值等,微觀檢查包括精子活力、精子密度、精子畸形率等。
1.直觀檢查
(1)射精量:以電子天平稱量精液,按1mL/g計,避免以量筒等轉移精液盛放容器的方法測量精液體積。
(2)色澤:正常的精液是乳白色或淺灰白,精子密度越高,色澤愈濃,其透明度愈低。如帶有綠色或黃色,則是混有膿液或尿液;若帶有淡紅色或紅褐色,則是含有血液。這樣的精液舍棄不用,應會同獸醫尋找原因。
(3)氣味:豬精液略帶腥味,如有異常氣味,應廢棄。
(4)pH值(酸堿度):以pH計測量。
2.微觀檢查
(1)精子活率檢查:活率是指呈直線運動的精子百分率,在顯微鏡下觀察精子活率,一般按0.1~1.0的十級評分法進行,鮮精活率要求不低於0.7。
(2)精子密度:指每毫升精液中所含的精子數,是確定稀釋倍數的重要依據。要求用血細胞計數板進行計數或精液密度儀測定。
(3)精子畸形率:畸形率是指異常精子的百分率,一般要求畸形率不超過18%。其測定可用普通顯微鏡,但需伊紅或吉姆薩染色,顯微鏡可直接觀察活精子的畸形率,公豬使用過頻或高溫環境會出現精子尾部帶有原生質滴的畸形精子。畸形精子種類很多,如巨型精子、短小精子、雙頭或雙尾精子,精子頂體膨脹或脫落、頭部殘缺或與尾部分離、尾部變曲。要求每頭公豬每兩周檢查一次精子畸形率。
六、精液的分裝、儲存、運輸
1.稀釋倍數確定
確定稀釋倍數應根據原精液的質量,尤其是精子的活率和密度、每次輸精所需的有效精子數、每份精液的體積、稀釋液的種類和保存方法。一般應稀釋3~9倍。
稀釋倍數=原精液精子密度×解凍後預測活率×稀釋後每份精液的體積稀釋後每份精液中所含的有效精子數
2.分裝精液
稀釋後,檢查精液活率,若無明顯下降,按每頭份80~90mL分裝;瓶上加蓋密封,並在分裝瓶上寫清楚公豬的品種、耳號,采精日期(月、日、時)。
3.保存
置22~25℃的室溫1h後(或用幾層毛巾包被好後)直接放置17℃冰箱中。保存過程中要求每12h將精液混勻1次,防止精子沉澱而引起死亡;每天檢查精液保存箱溫度並進行記錄,若出現停電應全麵檢查儲存的精液質量;盡量減少精液保存箱開關次數,以免造成對精子的打擊而致死亡。
4.運輸
用毛巾、棉花等包裹貯精容器,裝入10~15℃冰壺或泡沫箱等恒溫器中運輸,防止受熱、震動和碰撞。
七、輸精技術
1.輸精時機
母豬輸精時機以發情後期為好,當按壓母豬腰尻部,母豬表現很安定,或兩耳豎立,出現靜立反應,此時是輸精的最佳時機。如用公豬試情,一般在母豬願意接受公豬爬跨後的4~8h輸精為宜。
2.輸精方法
輸精方法有注射法和自然法兩種。輸精時,用玻璃注射器吸取精液,再將它連接膠管(自然法直接將精液容器連接膠管),然後把輸精膠管從母豬陰戶徐徐插進去,插到不能再插為止,動作要輕,輸精員用腳踏在母豬腰背部,左手拉住尾巴,右手持注射器,按壓注射器柄,精液便流入子宮。注射時,最好將輸精管左右輕微旋轉,用右手食指按摩陰核,增加母豬快感,刺激陰道和子宮的收縮,避免精液外流。輸完精後,把輸精管向前或左右輕輕轉動2min,然後輕輕拉出輸精管。
3.輸精次數
一個發情期輸精2次,第一次輸精後隔8~12h,再進行第二次輸精。一次輸精數量應按母豬的體重和精液質量來確定。每頭每次輸精量為20~40mL,有效精子數為10億~20億個。
4.注意事項
輸精場所應保持安靜清潔,輸精器械必須嚴格消毒。輸精前用0.1%高錳酸鉀溶液將母豬的外陰戶消毒,再用棉花洗淨。如輸精時母豬排尿,則應將精液棄去,更換新的精液。