一、實訓目標
(1)學會觀察理氣藥對離體腸平滑肌影響的實驗方法。
(2)了解青皮和四逆散對離體腸平滑肌解痙作用的機理。
二、實訓原理
多種動物的離體腸道在具有合適的存活環境中可以保持其自發性運動。青皮有疏肝破氣,消積化滯之功;四逆散能疏肝理氣、調和肝脾。兩者對家兔腸平滑肌有明顯解痙作用。
三、主要儀器、試藥及實驗動物
儀器和用具:麥氏浴槽(或離體器官恒溫浴槽)、生物機能實驗係統、張力換能器、注射器等。
試藥:青皮水煎液1g/mL和四逆散水煎液1g/mL(枳殼、芍藥、柴胡、炙甘草各5g,共煎成20mL),pH均為6左右。氯化乙酰膽堿1μmol/L、組織胺1μmol/L、氯化鋇10mg/mL、台氏液等。
實驗動物:家兔1隻。
四、實訓內容與步驟
本次實訓按下列步驟進行:
(1)調節恒溫浴槽裝置,使泵出的水通過麥式浴槽周圍保持恒溫,麥氏浴槽內的台氏液保持(36.5±0.5)℃。
(2)調節生物信號係統調零、定標(5~10g)、將張力換能器與生物機能實驗係統連接選擇通道並調節張力換能器。
(3)離體腸平滑肌的製備取2kg左右家兔一隻,用木槌擊枕骨致死,立即剖開腹腔,取空腸和回腸上段,置入盛有充氧(5% CO2)的冷台液中。沿腸壁分離腸係膜,用台氏液將腸內容物衝洗幹淨,將腸管剪成2~2.5cm的腸段,腸管兩端穿線結紮,一端係於通氣鉤上,然後輕輕放入恒溫麥氏浴槽中,另一端係於張力換能器上,加0.5~1g負荷,連接記錄儀。通氧氣調節速度為1~2s出現一個氣泡,不能影響腸肌的自主舒縮運動。
(4)觀察正常腸肌運動,調整麥氏浴槽內腸肌張力,使舒縮穩定後,描記一段腸肌正常運動曲線,然後依次向浴槽中滴加各種藥液。每次滴加藥液前均應衝洗腸肌2~3次,待舒縮恢複到用藥前水平後再加入下組藥液,描記舒縮曲線。
給藥順序為:
①青皮水煎液0.2~0.5mL,觀察並記錄作用曲線後衝洗。
②乙酰膽堿0.2~0.5mL,當腸肌收縮顯著時即滴加青皮水煎液0.2~1mL,待明顯抑製時再滴加與前同劑量的乙酰膽堿液。
③加組織胺液0.2~0.6mL,待收縮曲線明顯後即滴加青皮水煎液0.5mL,待曲線穩定後再加入與前等劑量的組織胺液。
④加氯化鋇液0.2~0.5mL,待收縮曲線顯著時即滴加青皮水煎液0.5~1mL,待曲線穩定後再加入與前等劑量的氯化鋇液。
按以上①~④的順序取另一段腸肌,觀察四逆散水煎液對兔離體腸肌的作用。結果根據青皮及四逆散水煎液對家兔離體腸平滑肌的作用曲線,分析比較其作用。
五、注意事項
(1)剪取兔腸管及衝洗、掛線等操作時應輕柔,腸腔內容物應洗淨。
(2)腸管兩端穿線時應穿對角線但切勿將腸腔縫死。
(3)暫時不用的腸管應浸泡在通入氧氣的冷台液中。
六、考核標準
優秀:能學會實驗方法基本原理,操作熟練,方法正確,結果統計處理正確。
合格:理解實驗方法基本原理,操作正確,結果統計處理正確。
不合格:理解實驗方法基本原理,操作方法不正確。