正文 第七節 畜禽心髒製劑(3 / 3)

②醇堿皂化法及溶劑法各有優缺點,可以靈活掌握。

③輔酶Q10常以無水乙醇進行結晶外,尚可用甲醇、丙酮、冰醋酸或醋酸乙酯進行結晶。

④輔酶Q10注射劑的配製方法:取輔酶Q10 1g,吐溫-80 10g,5%葡萄糖稀釋總體積為400mL,調勻後,經4號垂熔玻璃漏鬥過濾,灌封,滅菌,每支2mL含輔酶Q10 50mg。

(四)輔酶Q10的質量標準與檢驗方法

輔酶Q10的質量標準為:水分含量不得超過0.2%,熾灼殘渣不得超過0.1%,重金屬不得超過0.002%,其檢測方法參考《中國藥典》2005年版第二部第653頁。

1.熔點

輔酶Q10熔點為49℃,單乙氧基化合物熔點為43~43.5℃,雙乙氧基化合物為34.5~35.5℃。

2.薄層鑒定

以矽膠G為支持劑,以氯仿-苯1∶1(體積比),或石油醚-乙醚8∶2(體積比)為展開劑能很好地鑒定輔酶Q10及其他雜質。

3.紫外吸收

輔酶Q10在環己烷中的最大吸收波長為272nm,吸收係數E1%1cm272nm=172,最小吸收為238nm,吸收係數E1%1cm238nm=32.5。

輔酶Q10很易被還原,這時它在環己烷中的最大吸收波長改變為291nm,吸收係數E1%1cm272nm=172轉變為52,經重新氧化後可恢複原來的氧化型值。它的氧化還原電勢是0.542V,氧化型較還原型穩定。

輔酶Q10的氧化型及還原型吸收光譜,在無水乙醇中氧化型最大吸收為275nm,還原型最大吸收為236nm。

4.紅外吸收光譜

輔酶Q10的紅外光譜其特有的吸收帶有:二醌(6.10及6.18μ),二甲氧基(8.30及8.70μ),二醚鍵(7.90及9.11μ),次甲基及甲基(3.45,6.95及7.24μ)。

5.含量測定

①紫外分光光度法:紫外分光光度法是用硼氫化鈉(或鉀)將氧化型輔酶Q10轉變為還原型輔酶Q10,根據輔酶Q10的氧化型與還原型在275nm的不同吸收度來測定。

測定時,用無水乙醇做空白對照,將樣品稀釋一定濃度(約25~40μg/mL),於275nm波長測定氧化型吸收度。然後分別加入0.01mL新配製的硼氫化鈉溶液(20mg硼氫化鈉溶於3mL水)搖勻,待氣泡完全消失後,測定還原型輔酶Q10的吸收度。根據輔酶Q10的乙醇溶液在275nm的吸收係數為E1%1cm275nm=142計算即得。

②氰基乙酸乙酯法:氰基乙酸乙酯在堿性條件下取代了輔酶Q10分子上的甲氧基,形成藍色化合物,可供比色測定。

測定時,分別精密吸取輔酶Q10對照品及樣品的無水乙醇溶液(1mg/mL)0.5mL,置試管中各加入無水乙醇3.5mL,再加氰基乙酸乙酯和5g/L氫氧化鉀醇溶液各1mL,密塞,搖勻,於室溫暗處放35min後,於620nm波長處測吸收度,同時作試劑空白對照。

紫外法與氰基乙酸乙酯比色法是測定輔酶Q10的常用方法,另外還有乙二醇法與醋酐-硫酸乙酸法。近年來還采用高壓液相法,它比一般方法更簡單和專一。利用輔酶Q10與氰基乙酸乙酯生成熒光物質可用高壓液相進行輔酶Q10的定量分析。

(五)臨床應用

目前輔酶Q10主要用於治療心髒病和肝病。輔酶Q10是一種改善浮腫、肝腫大、肺充血及心絞痛的代謝性強心劑。對心髒充血性病人有較好療效,對缺血性心衰能使自覺症狀及心電圖改變。輔酶Q10用於病毒性肝炎、亞急性肝壞死的綜合治療,能延長存活時間,降低死亡率。亦用於治療爆發性肝炎所致的腦水腫,對於遷延性和慢性肝炎也有一定療效。

三、輔酶A

輔酶A(Coenzyme A,簡寫CoA,還原型CoASH)是乙酰化酶及許多其他酶類的輔酶,在物質代謝過程中起著傳遞酰基的作用,與脂類代謝、糖代謝、蛋白質代謝、固醇的生物合成以及乙酰化解毒等都有密切關係。

輔酶A廣泛存在於多種動植物組織和微生物中。動物的各種組織中輔酶A的含量很高,尤以肝髒為最豐富,心髒也有相當量,輔酶A在肝髒有50%以上集中於線粒體。

(一)結構及性質

輔酶A是由3′,5′-二磷酸腺苷、4′-磷酸泛酰和β-巰基乙胺三部分組成,分子式C21H36N7O16P3S,相對分子質量為767.54,結構式:

輔酶A表現的性質如下:

①高純度輔酶A為白色無定型粉末,具有典型的硫醇味,有引濕性,易溶於水,不溶於丙酮、乙醚和乙醇。

②與其他硫醇一樣,輔酶A易為空氣(特別在痕跡量金屬存在時)、過氧化氫、碘或高錳酸鹽等氧化成無活性的二硫化物,故製劑中宜加穩定劑(如半胱氨酸鹽酸鹽等)並最好充氮。

③輔酶A對熱比較穩定。試驗證明穩性隨著製品純度的增加而降低。例如:純度為1.5%~4.0%的輔酶A丙酮粉,在室溫條件下幹燥貯存三年尚不失活;其水溶液若pH低於7.0,低溫甚至室溫保存數天仍穩定。而高純度輔酶A(95%)的凍幹粉,有很強的引濕性,暴露於空氣中,很快吸水失活;若幹燥保存,結果則不一致,有的為時兩年尚不損失活性;有的則每過一個月失活1%~2%。

輔酶A水溶液在弱酸性時較穩定,但在堿性時則易破壞失活,如pH 8.0,40℃,24h可失活42.0%。

④紫外吸收光譜:輔酶A水溶液在260nm有最大吸收,最小吸收在230nm波長處。

(二)輔酶A加工工藝

1.工藝流程(心髒細胞色素C聯產工藝)2.工藝要點

(1)活性炭吸附將沸石吸附細丙後的流出液(見細丙生產工藝)用稀硝酸調pH 4.0,然後流入活性炭柱,吸附完畢,用蒸餾水洗,再用40%乙醇洗滌至洗液加10倍丙酮不呈白色渾濁為止。

(2)洗脫活性炭柱用含3.2%氨的40%乙醇洗脫,當流出液略呈微黃色,即開始收集,至pH 10.0左右停止收集。

(3)濃縮將洗脫液減壓濃縮至原體積1/10左右(外溫不超過60℃),用硝酸酸化至pH 2.5~3.0,放置冷庫過夜,離心,上清液繼續濃縮至原體積的1/20左右。

(4)沉澱將濃縮液用硝酸調pH 2.5~3.0,在劇烈攪拌下加入20倍酸化丙酮沉澱,放置冷庫過夜,離心得沉澱,用冷丙酮洗滌二次,低溫幹燥,測定效價。

(5)透析將丙酮幹粉溶於1.5倍新鮮冷蒸餾水中,裝入透析袋於無熱原蒸餾水中低溫透析48h。

(6)無菌分裝、凍幹準確測定透析外液輔酶A效價,加蒸餾水稀釋至120IU/mL,加甘露醇(15mg/支)和L-半胱氨酸鹽酸鹽(0.5mg/支),用1mol/L KOH調pH 5.5~6.0,無菌過濾,灌裝(0.5mL/支)凍幹,封口。

3.說明與討論

①豬心提取細丙後的沸石柱流出液約含輔酶A 5~8IU/mL。雖遠低於心肌中輔酶A的含量,但在生產細丙的同時仍可製得每千克豬心15支複合輔酶A,在這綜合利用上是有意義的。

廢液中雜蛋白較多,故用硝酸酸化後迅速加熱至95℃,立即冷卻去除雜蛋白,便於活性炭柱吸附。如細丙提取液在上沸石柱前已過濾清,則可不必加熱以盡量減少輔酶A的失活。

②複合輔酶A中除主要含有輔酶A外,尚有輔酶I、穀胱甘肽、ATP等。這些輔酶的同時存在可以提高輔酶A的療效。在保證臨床用藥安全可靠的前提下,製成複合輔酶A製劑是一條較為簡便的工藝路線。

(三)輔酶A質量標準與檢驗方法

輔酶A的質量標準為:按幹燥品計算,每1mg含輔酶A的效價不得低於250單位,其檢測方法參考《化藥部標準》第E6-131頁。

(四)臨床應用

輔酶A及ATP可供應能量,是促進細胞代謝的藥物,在許多疾病中作為綜合治療的一部分。主要用於治療白細胞減少症,原發性血小板減少性紫癲、功能性低熱等;對脂肪肝、肝昏迷、各種肝炎、冠狀動脈硬化及慢性腎機能不全引起的急性無尿、腎病綜合征、尿毒症等可作為輔助治療藥物;配合ATP、胰島素和細丙使用時對心肌梗死、新生兒缺氧、糖尿病引起的酸中毒症等也有一定效果。一般可增進食欲,增強體質,減弱疾病惡化和縮短病程。