1.進行動物細胞傳代培養時用胰蛋白酶散細胞,說明細胞間的物質主要是什麼成分?用胃蛋白酶行嗎?用胰蛋白酶分散細胞,說明細胞間的物質主要是蛋白質。不能用胃蛋白代替因為兩者的最適pH不同,動物細胞培養適宜的 pH為7.2-7.4,此環境下胃蛋白酶(最適pH2.0) 沒有活性,而胰蛋白酶(最適pH7.2-8.4)的活性較高胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎?為什麼?胰蛋白酶除了可以消化細胞間的蛋白外,長時間的作用也會消化細胞膜蛋白,對細胞有損傷作用,因此必須控製好胰蛋白酶的消化時間。2.將組織細胞分散成單個細胞將組織塊剪碎,用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理一段時間,這樣組織就會分三成單個細胞。思考:為什麼培養前要將組織細胞分散成單個細胞?①單個細胞容易和周圍環境進行物質交換-獲得營養物質、氧氣等,排出代謝廢物;.②分散成單個細胞培養能使細胞水平操作的其他技術得以實現。動物細胞培養過程1、選材:動物胚胎或幼齡動物的組織、器官原因:細胞增殖能力強,分裂旺盛,分化程度低,容易培養。2接觸抑製性:當細胞長滿於附著物表麵,相鄰細胞表麵間相互接觸,使細胞對數生長期停止進入穩定期,細胞生長大大減慢,細胞生長,死亡處於動態平衡。3群體效應:---單個細胞難生長,聚集成團易生長4原代培養(Primary Culture):(初代培養,初始培養)定義:直接從機體取材(細胞,組織或器官)並置於體外條件下生長到第一次移植繼代培養。二動物細胞培養特性1 鋪地依賴性(貼壁依賴性):大多數動物細胞隻能附著或貼在固體或半固體表麵上培養才能生長..例外:腫瘤細胞,血液,淋巴細胞、誘變育種誘變育種:是指人為地、有意識地將對象生物置於誘變因子中,使該生物體發生突變,從這些突變體中篩選具有優良性狀的突變株的過程。20世紀40年代開始誘變育種,獲得青黴素高產變異菌株。目前仍是一種比較經濟、高效的育種方法。因為:一是對生物調控機製還了解不夠透徹;二是基因工程的方法耗費大。5.多細胞動物和人體的細胞都生活在內環境中,根據你所學的內環境的知識,思考以下問題:1.體外培養細胞時需要提供哪些物質?充足營養(糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等合成成分及血清、血漿等天然成分。)2.體外培養的細胞需要什麼樣的環境條件?適宜溫度、PH和氣體環境;無菌無毒環境.4、體細胞核移植技術存在的問題(1)成功率非常低(2)克隆動物存在健康問題,表現出遺傳和生理缺陷(3)食品的安全性問題存在爭議病毒促使細胞融合的主要步驟如下:1.兩個原生質體或細在病毒黏結作用下彼此靠近;2.通過病毒與原生質體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間互相滲透,胞質互相滲透;3.兩個原生質體的細胞核互相融合,兩個細胞融為一體;4.進入正常的細胞分裂途徑,分裂成含有兩種染色體的雜種細胞。細胞融合的意義理論上說任何細胞,都有可能通過體細胞雜交而成為新的生物資源。這對於種質資源的開發和利用具有深遠的意義。融合過程不存在有性雜交過程中的種性隔離機製的限製,為遠緣物種間的遺傳物質交換提供了有效途徑。體細胞雜交產生的雜種細胞含有來自雙親的核外遺傳係統,在雜種的分裂和增殖過程中雙親的葉綠體、線粒體DNA亦可發生重組,從而產生新的核外遺傳係統。淋巴細胞雜交瘤和單克隆抗體的製備。細胞融合是指指人為地使兩種不同的生物細胞在同一培養器中,用無性的人工方法進行直接接觸,產生能同時具有兩個親本細胞有益性狀的雜交細胞技術。人工方法使兩個不同的細胞融合,發生體細胞雜交,形成新的雜種細胞。故有人稱融合細胞為雜種細胞概念:兩個或兩個以上的同種或異種細胞融合成為一個細胞的過程。Redleaf單克隆抗體是將抗體產生細胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞相融合,通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細胞成為純的單克隆細胞係而產生的。由單個B淋巴細胞經過無性繁殖(克隆),形成基因型相同的細胞群,這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。生物藥物的特性1、藥理學特性治療的針對性高、療效高:來源於生物體或其基因表達產物及其修飾物,活性高、針對性強,具有補充、調整、增強、抑製、替換或糾正代謝失調的功能。營養價值高,毒副作用小:在人體內易為機體吸收利用並直接2 參與人體的正常代謝與調節。一般比化學藥物更合理、更有效、 毒性較低、安全性較高、副作用較小。可能具免疫原性或產生過敏反應:相同物種不同個體之間的活3 性物質結構有較大的差異,導致概念:兩個或兩個以上的同種或異種細胞