動物細胞培養:
從動物體中取出相關組織,分散成單個細胞,然後放在適宜的培養條件下,讓這些細胞生長和增殖的技術
合成培養基:
將糖,氨基酸,無機鹽,促生長因子,微量元素等嚴格配置而成的培養基。加入動物血清以提供一個類似生物體內的環境,使用合成培養基時,通常需要加入血清,血漿等一些天然成分。
培養條件:
無菌,無毒條件:無菌處理培養液和所用培養用具,加抗生素,防汙染
定期更換培養液,清除代謝產物,防止細胞代謝產物累積對細胞自身危害。
營養物質:有機物(糖,氨基酸,促生長因子)
血清和血漿:提供細胞生長必須的營養成分
溫度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4)
氣體環境(95%空氣+5%CO2混合氣體)
其中5%CO2氣體是為保持培養液的pH穩定。
基本過程:
1)剪碎動物胚胎或幼齡動物組織,器官,用胰蛋白酶(或用膠原蛋白酶)處理(消化)。使其形成分散的單個細胞
2)處理後的細胞轉移到培養基中配成一定濃度的細胞懸浮液,細胞塊貼付在瓶壁(細胞貼壁)
3)當貼壁細胞分裂生長到相互接觸時,細胞停止分裂增殖(接觸抑製),重新用胰蛋白酶處理,配成一定濃度細胞懸浮液。
原代培養:
從機體取出後立即進行的細胞、組織培養。
當細胞從動植物中生長遷移出來,形成生長暈,並增大後,科學家接著進行傳代培養,即將原代培養細胞分成若幹份,接種到若幹份培養基中,使其繼續生長,增殖。
細胞株:
通過一定的選擇或純化方法,從原代培養物或細胞係中獲得的具有特殊性質的細胞。
細胞係:
培養超過50代時,大多數細胞已經衰老死亡,但仍有部分細胞發生了遺傳物質的改變出現了無限傳代的特征,即癌變,此時的細胞為細胞係。
胰島素促進葡萄糖攝取
分類:
原代細胞:將動物各種組織從機體取出,經酶(胰蛋白酶),螯合物(EDTA)或機械方法處理分散成單細胞,在合適的培養基中培養使細胞中得以生存,生長和繁殖。
(正常的動物細胞,一般培養10代後不再增值,死亡)
傳代細胞:細胞在培養瓶中長滿後就需要將其稀釋分種成多瓶,細胞才能繼續生長。
細胞傳代要在嚴格的無菌條件下進行,每一步都需要認真仔細地無菌操作。
培養的細胞為癌變成人為癌化的細胞,理論上可以無限增殖。
癌化方式:
癌基因突變,感染病毒,從癌症供體內分離,物理或化學方法(如紫外,化學試劑)等。
植物細胞和動物細胞培養比較:
固體 液體
植物生長素 動物血清
新的個體 不能表達全能性,隻含有同一種細胞的一個細胞係(細胞群)
植物細胞全能性 細胞增殖分化
脫分化和再分化 原代培養和傳代培養