糖酵解途徑:(線粒體外細胞質)
葡萄糖在己糖激酶的作用下,不可逆地生成6-磷酸葡萄糖,消耗一分子ATP生成ADP,6-磷酸葡萄糖在磷酸己糖異構酶的作用下可逆地生成6-磷酸果糖,6-磷酸果糖在磷酸果糖激酶的作用下,消耗一分子ATP生成ADP,不可逆地生成1,6二磷酸果糖,1,6二磷酸果糖在醛縮酶的作用下先裂解成1分子的磷酸二羥丙酮和1分子3-磷酸甘油醛,1分子的磷酸二羥丙酮可逆地生成1分子的3-磷酸甘油醛後,才可進行下一步,在3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下可逆地生成1,3-二磷酸甘油酸(酰基),消耗NAD和pi生成H和NADH,再在磷酸甘油酸激酶的作用下 ,消耗磷酸和ADP生成ATP,生成3-磷酸甘油酸,在磷酸甘油酸變位酶的作用下生成2-磷酸甘油酸,再在烯醇化酶的作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸,再在丙酮酸激酶的作用下,不可逆消耗ADP和pi生成ATP,生成丙酮酸。
糖異生
丙酮酸在丙酮酸羧化酶的作用下生成草酰乙酸,在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶,消耗GTP生成GDP和Pi和二氧化碳,和磷酸烯醇式丙酮酸。
果糖-1,6-二磷酸在果糖-1,6-二磷酸酶,消耗水生成pi和果糖-6-磷酸
葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸酶作用下生成葡萄糖
質粒提取:
solution 1 tris -HCL緩衝液,EDTA螯合劑,螯合金屬離子,RNaseA:水解核糖核酸酶
solution2:
NaOH:破壞細胞壁,破壞氫鍵,使大DNA從雙鏈變為單鏈,質粒超螺旋
SDS:使細胞膜溶解,使蛋白變性
solution3:KAc:與SDS結合形成PDS,PDS帶著基因蛋白質沉澱從而分離出來,然後用高鹽將質粒吸附到矽膠柱上,因為柱為負性電極,高鹽中Na離子為正電極,Na離子與柱吸附 DNA為負性的,DNA與Na結合
然後用異丙醇除去雜蛋白,對溶液進行純化,然後用70%乙醇進行濃縮,最後洗脫得到目標產物。
conventional (常規的)Pcr:
菌落pcr:colony pcr
反向PCR:inverse pcr
熒光定量PCR:Real-time PCR表達倍數(基因表達量)
融合PCR:overlap extension PCR
降落PCR:touch down PCR
啟動子:是DNA鏈上能與RNARol結合並有效起始RNA轉錄的DNA序列
在一條DNA序列中,啟動子包括:識別位點-35區,結合位點-10區。-1和1之間的為起始位點。
識別位點和結合位點之間有17bp左右的距離。
trp的啟動子-35區ttgaca,-10區ttaact
tRNATyr的啟動子-35區tttaca,-10區tatgat
lac啟動子:-35區tttaca,-10區tatgtt
recA啟動子:-35區ttgata,-10區tataat
Ara BAD啟動子:-35區ctgacg,-10區tactgt,共有序列:-35區ttgaca,-10區tataat
阻遏蛋白:由調控基因(i基因)編碼,DNA結合蛋白,特異性識別並結合操縱子,阻止轉錄。信號分子+阻遏蛋白—變構—結合DNA(或去結合)。特異性結合位點:AATTGT ACAATT
i與操縱子(O)連在一起時,順式調節子,i與操縱子特別遠,反式調節子(trans-)
正調控蛋白:CRP蛋白
在一個啟動子中,CRP結合部位為GTGAGCTCAC,-35區TTTACAC和-10區TATGTT(lac啟動子)是RNA聚合酶結合部位,+1區AATTGT ACAATT 為阻遏蛋白結合部位
上調控序列被稱為順式作用元件。
倒位蛋白:位點特異性重組酶