(五)操作規程
按照試劑說明書、所用儀器方法SOP進行測定。
(六)結果判定
1.ELISA法
(1)臨界值(bsp;=陰性對照OD均值+0.18(各試劑廠家設置有所不同),陰性對照OD值小於0.05時以0.05計算。
(2) 陽性:樣品的OD值SbrCO≥1,初篩結果為陽性者應作TPPA檢測確證,如凝集不明顯,為可疑,建議其複查。
(3)陰性:樣品的OD值SbrCO<1。
2.TP-PA法
(1)判定標準
2+:形成均一凝集,凝集顆粒在孔底呈膜狀伸展。
1+:孔底形成較大的環狀凝集,外周邊緣不均勻。
±:孔底形成小環狀凝集,外周邊緣光滑、完整。
-:顆粒在孔底聚集成紐扣狀,邊緣光滑。
(2)結果判定
陽性:標本與非致敏顆粒(最終稀釋為1∶40)反應,顯示為(-);但與致敏顆粒(最終稀釋為1∶80)反應,顯示為(+),或如(+)的稀釋倍數為1∶80以上,則以(+)的最終稀釋倍數為抗體滴度。
陰性:無論未致敏粒子呈現何種反應,隻要標本與致敏顆粒(最終稀釋度為1∶80)反應圖像顯示為(-),最終判定為陰性。
可疑:標本與未致敏顆粒(最終稀釋度為1∶40)反應,顯示為(-);標本與致敏顆粒(最終稀釋度為1∶80)反應,顯示為(±)時,最終判定為可疑。
3.乳膠層析快速法
(1)陽性(+):兩條紫紅色帶出現。一條位於測試區內(T), 另一條位於質控區內(C)。
(2)陰性(-):僅質控區內(C)出現一條紫紅色條帶,在測試區內(T)無紫紅色條帶出現。
(3)無效:質控區內(C)未出現紫紅色條帶,表明不正確的操作過程或試劑盒已變質損壞。
4.TRUST法
陽性反應(R)(3+~4+):可見中等或較大的紅色凝集塊。
弱陽性反應(W)(1+~2+):有較小或小的紅色凝集塊,
任何強度的凝集都報告陽性。
陰性反應(N):僅見細小紅色粗糙物聚於中央一點,但非凝集。
5.快速血漿反應素試驗:參考反應標準圖片以陽性(4+、3+)(R),弱陽性(2+、1+)(W),或陰性(-)(N)記錄結果。
(七)質控及注意事項
1.ELISA法用水浴加熱時,用溫度計觀察水浴鍋溫度。
2.可購買定值血清,每日臨界值(SbrCO值)應在均值±3SD範圍內,為在控。
3.TP-PA法試劑在使用前應搖勻。
4.甲苯胺紅不加熱血清試驗是非特異性反應,需結合臨床進行綜合分析,必要時需做梅毒螺旋體抗體特異性試驗(例如TP-ELISA)。
(八)性能參數
使用酶標儀測定梅毒時靈敏度99.52%,特異性99.95%;精密度:變異係數4%~8%。
(九)正常值
TP抗體陰性。
(十)生物安全防護
1.在檢測前,所有標本均應視為“陽性”標本即生物危險品。
2.如操作中不慎灑落血液,要及時對汙染台麵消毒處理。
3.操作前一定要做好自身防護(穿白大衣、戴口罩、帽子、乳膠手套)。