冷凍精液的劑型。冷凍精液的主要劑型有安瓿凍精、顆粒凍精和細管凍精3種。
安瓿凍精:由於安瓿體積大,易爆裂,目前已很少使用並被其他方法所取代。
顆粒凍精:優點是簡便,易於製作,體積小,好貯存,成本低,於推廣。此方法經濟實用。缺點是易汙染,不便標記。
細管凍精:優點是精液不易汙染,便於標記,適於機械化生產,解凍運輸方便。缺點是成本高,必須用優質塑料細管,大量生產需要成套專用設備,貯存所占體積也比顆粒凍精大。但目前細管凍精因其優點已取代了顆粒凍精。
常用牛品種代碼。按國家標準做成的牛冷凍精液,不論是細管凍精還是顆粒凍精,由於標記部位的麵積所限,牛品種都是用拚音字母的聲母縮寫標記,配種技術人員必須知道和掌握,以免誤用。
C.冷凍精液的保存和取用應注意的事項。技術人員將抽樣檢查合格的各種劑型的冷凍精液,分別妥善包裝以後,還要作好品種、種牛號、冷凍日期、劑型、數量等標記,然後放人超低溫的液氮內長期保存備用。在保存過程中,必須堅持保存溫度恒定不變、精液品質不變的原則,以達到精液長期保存的目的。
冷凍精液取放時,動作要迅速,每次最好控製在秒之間,並及時蓋好容器塞,以防液氮蒸發或異物進人。在液氮中提取精液時,切忌把包裝袋提出液氮罐口外,而應置於罐頸之下。
液氮易於氣化,放置一段時間後,罐內液氮的量會越來越少,如果長期放置,液氮就會耗幹。因此,必須注意罐內液氮量的變化情況,定期給罐內添加液氮,不能使罐內保存的細管精液或顆粒精液暴露在液氮麵上,平時罐內液氮的容量應該達到整個罐的2/3以上。拴係精液包裝袋的繩子,切勿讓其相互絞纏,使得精液未能浸人液氮內而長時間懸吊於液氮罐中。
牛精液的運輸。
①常溫保存的牛精液的運輸。常溫保存的牛精液在運輸時,路程要求在15-20千米內,交通工具可以是火車、汽車、自行車或徒步,運輸途中,在20-30的溫度下和非常劇烈的振蕩,對精子活力和存活時間影響不大。
②牛冷凍精液的運輸。冷凍精液需要運輸到外地時,必須先查驗一下精子的活力,並對照包裝袋上的標簽查看精子出處、數量,到萬無一失後方可進行運輸。選用的液氮罐必須具有良好的保溫性能,不露氣、不露液。運輸時應加滿液氮,罐外套上保護外套。裝卸應輕拿輕放,不可強烈震動,以免把液氮罐掀倒。此外,防止液氮罐被強烈的陽光暴曬,以減少液氮蒸發。
液氮罐的使用及保護。
①液氮罐的結構。液氮罐由外殼、內層、夾層、頸管、蓋塞、貯精提筒及外套構成。
液氮罐有內、外兩層,層稱為外殼,其上部是罐口。內層也稱為內膽,其中的空間稱為內槽,可將液氮和冷凍精液貯存於內槽中。內槽的底部有底座,用於固定貯精提筒。
內、外兩層間的空隙為夾層,是真空狀態,夾層中裝有絕熱材料和吸附劑,以增強罐體的絕熱性能,使液氮蒸發量小,延長容器的使用壽命。頸管有一定的長度,以絕熱黏劑將罐的內、外兩層連接,其頂部為罐口,與蓋塞之間有孔隙,利於液氮蒸發的氮氣排出,從而保證安全,同時具備絕熱性能,以盡量減少液氮的氣化量。蓋塞是由絕熱性能良好的塑料製成,以阻止液氮蒸發,具有固定貯精提筒手柄的凹槽。貯精提筒置於罐內槽中,可以貯放細管凍精、安瓿凍精及顆粒凍精,其手柄掛於罐口邊上,以蓋塞固定。中小型液氮罐為攜帶運輸方便,有一外套並附有挎背用的皮帶。
②液氮罐的使用及保養。
液氮的填充。初次添加液氮時,要少且動作慢,使整個罐部溫度均勻地降低,然後再充滿。即要有個預冷的階段。防止液氮直接衝擊頸部,最好用大漏鬥。當液氮消耗掉時,即應補充液氮。罐內液氮的剩餘量可用稱重法來估算,也可用帶刻度的木尺或細條等插至罐底,經10秒取出,貯存及取用精液。貯存精液時必須迅速地放人經預冷的貯精提筒內,浸人罐內液氮麵以下,將貯精提筒底部套人底座,手柄置於罐口的槽溝內。顆粒凍精可裝人紗布袋或小瓶內,浸人液氮,紗布袋或小瓶係一標簽固定在罐口外。
取用精液時操作要敏捷迅速,貯精提筒提至頸管基部5秒內完成,要注意不要摩擦頸管內壁,並且不可過分地彎曲提筒的手柄(先推到對麵,再提起來)。取完精液後注意將精液容器再次浸人液氮內。
液氮罐的保養。液氮罐應放置在涼爽、幹燥、通風良好的室內,使用和搬運過程中防止碰撞。注意保護蓋塞和罐的頸部,此部分質地脆弱易於損壞。罐體不可橫倒放置。每年應清洗一次罐內雜物(內有顆粒或其他東西)將空罐放置兩天後,用40-50中性洗滌劑擦洗,再用清水多遍衝洗,使之自然幹燥或用吹風機吹幹,方可使用。如使用過程中,罐子的外壁結霜,說明罐子的真空失靈,要盡快取出精液置於其他貯存罐中。
液氮罐是長期貯存精液的容器,為了使其中存放的精液質量不受影響,我們必須會使用液氮罐,並進行定期管護。
液氮罐要穩定安放不要隨便四處挪動,不能傾斜更不能倒伏,要精心愛護隨時檢查,防亂碰亂摔容器的現象發生。
輸精技術輸精是把一定量的合格精液,適時而準確地輸人到發情母牛生殖道內的一定部位,以使其達到妊娠的操作技術。這是人工授精技術的最後一個重要環節。
輸精前的準備。
①母牛的準備。經發情鑒定已確定要配種的母牛,在輸精前應進行適當的保定。牛一般在輸精架內或拴係於牛床上保定輸精。母牛保定後,將其尾巴拉向一側,清洗陰門及會陰部,再用消毒液進行消毒,然後用滅菌的生理鹽水進行衝洗。
②輸精用的器械和用具的準備。各種輸精器械在使用前必須徹底清洗、消毒,再用稀釋液衝洗。玻璃和金屬輸精器可用蒸汽、75%的酒精消毒,或置於高溫幹燥箱內消毒。
輸精器一般以每頭母牛一支為宜,但當輸精器不夠使用時,可用75%酒精棉球塗擦消毒外壁,然後用稀釋液衝洗外壁及管腔23次再使用。
③精液的準備。用於輸精的精液必須符合所要求的輸精劑量、精子活力等級及有效精子數。
鮮精液:鏡檢精子活力不低於0.7方可用於輸精。
常溫保存的精液:檢精子活力不低於0.6,輸精量毫升輸人有效精子數為0.3億0.5億個,方可用於輸精。
低溫保存的精液:必須首先升溫至35左右,鏡檢精子活力不低於0.5,輸精量12毫升輸人有效精子數0.3億億個,方可用於輸精。
冷凍保存的精液:必須首先升溫至35左右,鏡檢精子活力不低於0.3,輸精量0.21.0毫升輸人有效精子數億0.3億個,方可用於輸精。
④輸精人員的準備。輸精人員要身作工作服,指甲剪短磨光,手掌和手臂洗淨擦幹後用75%的酒精消毒。牛直腸把握輸精時,則應帶長臂手套並塗以滅菌潤滑劑。
⑤牛冷凍精液配種的工作室。工作室有35米2的麵積,能放下一個液氮罐和一張工作用桌即可。使用一間獨立的房屋或在一個幹淨、衛生的房間選用一個角即可,麵積大一些更好。地麵以水泥或磚地為好,易打掃,灰塵少。房間應有水、電,房間及周圍環境幹淨、衛生、幹燥、通風。每日應打掃地麵衛生,擦去桌麵和器具的塵土,1周(至少1個月)應大掃除一次。房間內不能存放有揮發性氣味的藥品,室內禁止吸煙、禁止堆放與工作無關的物品。
輸精的基本要求。
①從液氮罐中取貯存冷凍精液的要求。首先,液氮罐應放在陰涼處,室內要通風,注意不要用不衛生的工具汙染液氮罐。及時補充液氮,證液氮麵高度應高於貯存的冷凍精液,好將冷凍精液沉人罐底。冷凍精液取出後及時蓋好蓋塞,為減少氮消耗,口可用毛巾包圍。
其次,取用冷凍精液時,貯精提筒不離開液氮罐口,應在液氮瓶口水平線下,停留時間不超過10秒鍾,需繼續操作時,可將貯精提筒浸人液氮後再提起。
②精液的升溫與解凍要求。鮮精液或常溫保存的精液要求緩慢升溫到35左右。夏天可采取自然升溫法,即將精液置於室內2030分鍾即可。冬季要采取先用冷水浸泡,然後逐漸加人溫水,使之緩慢升溫到所需溫度。
低溫和冷凍保存的精液要進行升溫或解凍,精液要經精子活力檢查,符合輸精質量要求者(液態保存精液的精子活力不低於0.6,冷凍保存精液的精子活力不低於0.3)才能使用。然後按各種家畜的輸精劑量標準,將精液裝人輸精器中,用毛巾或紗布蓋好,以待使用。
③細管凍精的解凍要求。細管凍精取出後,棉塞朝下,浸人1825常溫(國家標準為3540,實際生產中細管取用有兩個溫差值,使其精子活力有所降低)水浴中停留至溶解化凍時取出,用滅菌的棉花球或衛生紙擦幹細管外壁,用消毒細管鉗剪去封口端。
④裝人輸精槍的要求。裝精液的塑料細管的棉塞端朝上,塑料細管開口處插人輸精槍外套內,金屬輸精槍的鋼蕊插人棉塞端口內,將金屬槍連同塑料細管推至套管的頭部。
若套管較長,應將其後端剪去一段,以免造成塑料細管內的精液存留在外套內。
⑤輸精前的要求。
輸精的劑量。通常體型大、經產、產後配種和子宮鬆弛或屢配不孕的母牛,應適當增加輸精量。相反,對體型小、初次配種和當年空懷的母牛,可適當減少輸精量。液態保存精液其輸人的有效精子數一般比等量的冷凍精液多,而細管凍精則又比安瓿凍精或顆粒凍精輸人的有效精子數少一些。
精液品質較差時輸精量應適當增加,以保證輸人的有效精子數達到規定標準。
輸精的時間。在生產實踐中,常用發情鑒定來判定輸精適宜時間,同時,根據對配種繁殖檔案的分析和調查,來具體摸索和掌握各頭母牛的發情排卵規律和成功輸精受胎的經驗也是十分重要的。適時配種,是提高受胎率的很重要的環節。給母牛輸精的時間一般在母牛表現發情後小時內進行,前後輸兩次。第1次輸精的時間安排為:清晨發情的母牛在下午輸精,近中午發情的母牛在晚上輸精,而傍晚發情的母牛則在第2天的上午輸精。間隔812小時進行第2次輸精。
適宜的輸精時間是根據母牛的排卵時間、精子和卵子的運行速度和到達受精部位(輸卵管壺腹部)的時間,以及它們可能保持受精能力的時間和精子在母牛生殖道內完成獲能時間等綜合決定的。總的說來,母牛適宜在排卵前的小時進行輸精,以便精子剛剛完成獲能並已到達受精部位,生命力強的精子恰恰和排出不久的卵子相遇而受精。如果輸精太早,等卵子到達受精部位時,精子已衰老或喪失受精能力甚至已死亡,從而降低受精能力。輸精過遲時,即使精子具有很強的受精能力,但卵子排出時間已久而衰老,同樣不能受精。
另外,使用冷凍精液輸精更應注意適時輸精,因為牛精液經過冷凍後,其精子在母牛生殖道內的可能存活時間受到影響,無疑會比液態保存精液特別是比新鮮精液中的精子存活時間短。
輸精的部位。輸精的部位與受胎率有關。輸精部位較深者(如子宮內),輸精量比淺部輸精(如子宮頸口)可以適當減少。輸精技術熟練者,往往可以使用較少的精液使母牛達到正常的受胎率。
輸精方法也影響母牛的受胎率。冷凍精液輸精采用直腸把握子宮頸輸精法。直腸把握子宮頸輸精法是輸精人員將手臂插人母牛的直腸,把握固定好子宮頸,另一手將輸精器經母牛陰道插人到子宮頸內口後注人精液。這種輸精方法的特點是,具簡單、操作安全,母牛無痛感而且對初配牛也很適用,並且受胎率高。輸精時,做到輕插、探、緩注、慢出。
輸精方法。輸精方法有如下兩種:
①陰道開張器輸精法。此方法是用一手持塗抹有少量滅菌潤滑劑的陰道開張器,插人陰道將其張開,借助額燈等光源尋找子宮頸外口。然後用另一手將吸有精液的輸精器的導管尖端小心插人子宮頸內12厘米深處,緩慢注人精液,隨之取出輸精器,接著取出陰道開張器。為了防止母牛拱背而使精液倒流,可在輸精時和輸精後由助手用力按捏母牛背腰部,並稍待片刻後再將母牛緩步牽回牛舍。輸精過程中如果母牛左右擺動不定,則應暫時中止操作,並立即將陰道開張器和輸精器交由一手握住保定,使兩者一起隨著母牛一個方向擺動,以免輸精器突然折斷。待母牛安定後再繼續輸精。
此方法能直接看到輸精器插人子宮頸口內,適宜於初學者。但操作煩瑣,容易引起母牛騷動,易使陰道黏膜受傷,且因輸精部位淺,精液容易倒流,故受胎率較低。因此,目前已很少采用。
②直腸把握子宮頸輸精法。直腸把握子宮頸輸精法亦稱深部輸精法。右手將陰門撐開,左手將吸有精液的輸精器,從陰門先傾斜向上插人陰道約5-10厘米左右,即通過陰道前庭避開尿道口後,再向前水平插人直抵子宮頸外口。
隨後右手伸人直腸,隔著直腸壁探明子宮頸位置,並將子宮頸半捏於手中,使子宮頸下部緊貼固定在骨盆腔底上。然後在兩手協同配合下,使輸精器的導管尖端對準子宮頸外口,並邊活動邊向前插,當感覺穿過23個子宮頸內橫行的月牙形皺褶時,即可緩慢注人精液。輸精完畢後,先抽出輸精器,然後抽出手臂。輸精過程中,輸精器不可握得太死,應隨牛的後軀擺動而擺動,以防折斷輸精器的導管。輸精器插人陰道和子宮頸時,要小心謹慎,不可用力過猛,以防黏膜損傷由於此方法將精液注人子宮頸深部,受胎率較高;用具較少,操作安全,陰道不易感染;母牛無痛感刺激,處女牛也可使用。但此方法初學者較難掌握,在操作時要特別注意把握子宮頸的手掌位置,不能太靠前,也不能太靠後,否則都不易將輸精器插人子宮頸的深部。