達·芬奇在1503年期間陷入過一場財務糾紛，沒有什麼收入，這可以解釋他為何會對一幅私人肖像畫有興趣，而他的父親也從中積極促成了這件事。蒙娜麗莎的右手放在左手上，充分表現出溫良而忠貞的儀態，而她的穿著也顯示出當時的時髦風尚。有學者認為，蒙娜麗莎在畫像上所顯示出來的狀態，或許比她真實的狀況更加殷實，並且這幅畫像的麵積非常大，是當時比較富裕的藝術收藏者才會選擇的尺寸，這種奢侈的大手筆，也被解釋為蒙娜麗莎夫婦極具有進取心。
十年畫完肖像卻私藏
達·芬奇為蒙娜麗莎畫的這幅個人肖像前後一共用了10多年的時間，但是最終，達·芬奇沒有將這幅畫交給蒙娜麗莎。有的學者認為這是因為達·芬奇沒有拿到報酬的緣故，但也有學者通過研究之後發現，這其中的原因並沒有那麼簡單。
實際上，達·芬奇的抉擇可能和佛羅倫薩當時顯赫的梅弟奇家族有關。梅弟奇是15～16世紀意大利最顯赫的家族。達·芬奇時代的教皇喬凡尼·梅弟奇就來自這一家族。梅弟奇家族熱愛藝術，慷慨地資助了包括達·芬奇、米開朗基羅和拉斐爾在內的大批藝術家，但另一方麵，他們搞藝術的錢卻是搜刮民脂民膏得來的，這引起了許多其他佛羅倫薩貴族的不滿，其中便有麗莎的娘家——格拉迪尼家族。1503年，就是在達·芬奇為蒙娜麗莎畫像的時候，兩大家族的矛盾激化到了兵戎相見的地步。夾在其中的達·芬奇因此斷掉了和蒙娜麗莎家的聯係。1511年，佛羅倫薩被教皇軍攻破，格拉迪尼家族遭流放。達·芬奇則在1517年左右帶著蒙娜麗莎的畫像離開佛羅倫薩，去往法國。
64歲病逝修道院
在和梅弟奇家族的紛爭中，麗莎的丈夫也被牽連入獄，但所幸很快就得到了釋放。而在那之後，這位畫中的女子的命運，又成為一段空白。
一直到2007年，意大利一名從事藝術史研究的學者吉塞普·帕蘭蒂費盡周折，終於找到了一份已經泛黃的文件，是蒙娜麗莎的死亡檔案。文件上顯示，麗莎的丈夫於1538年死於瘟疫，終年79歲。而59歲的蒙娜麗莎當時也身染重病，被她一個當了修女的女兒帶到了佛羅倫薩的聖奧納修道院靜養，她在那裏生活了4年多之後死去，終年64歲。蒙娜麗莎最後的離別並不淒涼，幾乎整個教區的人都來參加了她的葬禮。她最後就被葬在了聖奧納修道院。
然而，這一發現還是來得晚了一些，因為人們愕然地發現，除了僅剩下的幾堵外牆和一些14世紀的拱門，當年盛極一時的聖奧納修道院早已不複存在。在它的遺址上取而代之的是一家煙草廠和一所大學的實驗室。早在30年前，開發商就已經將聖奧納修道院的墓園和地基一起挖掉了，而蒙娜麗莎的遺骸也不知所終。而佛羅倫薩政府有意在聖奧納修道院的遺址上為蒙娜麗莎修建一座紀念館。