依達拉奉預處理對兔肺缺血再灌注損傷後肺水腫的影響
論著
作者：賈偉偉 李慧
[摘要] 目的探討依達拉奉對兔肺缺血再灌注損傷後肺水腫的保護作用及可能機製。方法建立兔肺缺血再灌注動物模型。家兔40隻，隨機分為4組。ED組和VC組分別給予依達拉奉和維生素C預處理；CO組行左肺缺血再灌注；SH組隻開胸並帶套。各組在缺血1 h並再灌注2 h後分別檢測SOD、MDA、iNOS和eNOS。取部分左肺下葉，測量肺W/D、肺含水量和MPO。靜注伊文思藍，比較通透性。結果再灌注後ED組的SOD、eNOS高於VC組和CO組；ED組的MDA、iNOS、肺W/D、肺含水量、MPO及伊文思藍含量低於VC組和CO組。結論依達拉奉能減輕肺缺血再灌注損傷後肺水腫的程度，具有肺保護作用。
[關鍵詞] 依達拉奉；肺缺血再灌注損傷；肺水腫；兔
[中圖分類號] R96 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2013）01-0001-04
自從McCord[1]提出了缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion-injury，IRI）的概念以來，對各器官組織的缺血再灌注損傷的研究一直成為醫學領域的重點和難點。其中，肺IRI的重要原因之一就是氧自由基形成。依達拉奉是一種新型自由基清除劑，對腦、心髒、肢體等多種組織器官的IRI有保護作用。本研究擬通過建立兔肺IRI動物模型，觀察依達拉奉對肺IRI後肺水腫的減輕作用，探討其可能機製，並為臨床治療提供參考。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
10～12周齡健康家兔40隻，雌雄兼用，體重2.5～3.0 kg，由齊齊哈爾醫學院動物實驗中心提供。
1.2 主要材料
動物人工呼吸機（DW-2000型，上海嘉鵬）；生物機能實驗係統（成都泰盟）；電熱恒溫幹燥箱（上海新諾）；台式離心機（湖南湘儀）；血氣分析儀（美國IL公司GEM-premier 3000）；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、誘導型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）試劑盒和髓過氧化物酶（myeloperoxidases，MPO）試劑盒（南京建成）；內皮型一氧化氮合成酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）試劑盒（北京華耐特）；伊文思藍（evens blue）（上海滬宇）；依達拉奉（edaravone）注射液（昆明積大，國藥準字H）；維生素C（vitamin C）注射液（哈藥集團三精製藥，國藥準字H）。
1.3 動物模型製備及分組
經耳緣靜注25%烏拉坦進行麻醉。頸正中切開皮膚，遊離氣管，作T型口，4.5F氣管插管並結紮固定，連接呼吸機行機械通氣，呼吸參數如下：頻率為30次/min，吸呼比為1：1，潮氣量為15 mL/kg，氧濃度為21%。穩定15 min後開始模型複製。生理鹽水（0.5 mL/min）持續靜滴；剪斷第3～6肋軟骨及腋後線肋骨以暴露左胸腔器官，切開左胸膜，斷其左下肺韌帶，遊離肺門，以7-0線作為阻斷帶將左肺門套帶以備阻斷左肺門用；並行全身肝素化。
隨機分為4組（2組實驗組、1組對照組和1組假手術組），每組10隻。依達拉奉組（ED組）：於呼氣末時阻斷左肺門造成左肺缺血狀態，1 h後鬆開阻斷帶，左肺恢複灌注並複張後觀察2 h；阻斷左肺門前5 min經股靜脈滴注依達拉奉（5 mg/kg），2 min內靜注完；維生素C組（VC組）：手術過程同ED組，阻斷左肺門前5 min經股靜脈滴注維生素C（0.5 g/kg），2 min內靜注完；對照組（CO組）：手術過程同ED組，不給予任何藥物；假手術組（SH組）：開胸後僅遊離左肺門，不阻斷肺門，觀察3 h。各組術中自頸總動脈插管，用於監測生命體征和采血。
1.4 檢測指標
1.4.1 動脈pH值與靜脈血氧分壓（PvO2）測定 ED組、VC組和CO組在缺血前、再灌注30、60、90和120 min及SH組在其對應時間點上分別取頸總動脈血和左下肺靜脈血作血氣分析檢測靜脈血氧分壓（PvO2）與動脈血pH值。
1.4.2 血漿SOD、MDA、iNOS和eNOS值測定 ED組、VC組和CO組在缺血前、再灌注60和120 min及SH組在其對應時間點上取左下肺靜脈血檢測SOD、MDA、iNOS和eNOS，具體步驟按試劑盒要求進行；並測算各生化指標在缺血前與再灌注120 min後的差值，比較抗氧化效果。
1.4.3 肺濕幹重比（W/D）與肺含水量測定 ED組、VC組和CO組在缺血1 h、再灌注2 h，SH組在開胸3 h於近肺門處結紮並切取部分左肺下葉相同部位組織約500 mg，計算肺濕幹重比（W/D），並通過測量肺濕幹重來計算肺含水量，檢測肺水腫情況：吸幹肺表麵水分後稱重，為濕重（W），置於70℃幹燥箱中烘幹3 d後稱幹重（D），通過公式算出肺含水量。肺含水量=（濕重-幹重）/濕重。
1.4.4 MPO含量測定上述方法取部分左肺下葉凍存，采用比色法測定肺組織MPO含量，具體步驟按試劑盒要求進行。
1.4.5 伊文思藍含量測定手術結束前，各組經股靜脈注射2%伊文思藍（1.5 mL/kg），然後取左肺上葉約200～350 mg，吸幹血液，配伍比例為每100 mg濕重組織：2 mL甲酰胺，置入45℃水浴中，抽提離心後於波長632 nm處測吸光度，算出伊文思藍含量，比較肺血管通透性。
1.5 統計學處理
采用SPSS 15.0統計學軟件進行ANOVA方差分析。實驗數據采用均數±標準差（x±s）表示，各組計量資料采用t檢驗，並進行LSD檢驗作兩兩比較。P